药物的鉴别实验药物的鉴别实验Identification test of drugIdentification test of drug第二章第二章； 药物的物的鉴别实验 药物的物的杂质检查 药物定量分析与分析方法物定量分析与分析方法验证药品检验任务的根本规律药品检验任务的根本规律Basic regularity of drug inspection；一、药物鉴别的目的和特点一、药物鉴别的目的和特点1 1鉴别目的鉴别目的 药物鉴别根据药物的化学构造药物鉴别根据药物的化学构造和理化性质进展某些化学反响，测定某些理化和理化性质进展某些化学反响，测定某些理化常数或光谱特征，来判别药物及其制剂的真伪。常数或光谱特征，来判别药物及其制剂的真伪。只需在药物鉴别无误的情况下，药物被证明是只需在药物鉴别无误的情况下，药物被证明是真的，才有必要接着进展杂质检查、有效化学真的，才有必要接着进展杂质检查、有效化学成份含量测定。在药物分析中药物鉴别属首项成份含量测定。在药物分析中药物鉴别属首项任务，为确保临床用药的平安与有效提供科学任务，为确保临床用药的平安与有效提供科学根据。根据。第一节常用鉴别方法第一节常用鉴别方法；1 1药物鉴别是根据药物的分子构造、理化药物鉴别是根据药物的分子构造、理化性质，采用生物学、化学或物理化学方法来判性质，采用生物学、化学或物理化学方法来判别药物的真伪。别药物的真伪。药典所收载的药物项下的鉴别实验方法，仅药典所收载的药物项下的鉴别实验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证明适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证明能否为其所标示的药物，它与分析化学中的定能否为其所标示的药物，它与分析化学中的定性鉴别有所区别。性鉴别有所区别。2 2特特 点点 ；2药药物物鉴鉴别别不不只只由由一一项项实实验验就就能能完完成成，而而是是采采用用一一组组实实验验工工程程2个个或或2个个以以上上全全面评价一个药物，力求使结论正确无误。面评价一个药物，力求使结论正确无误。； 3药物鉴别通常选用综合分析实验法，用化学鉴别法、药物鉴别通常选用综合分析实验法，用化学鉴别法、仪器分析法、生物检定法等不同方法鉴别同一种供试品，仪器分析法、生物检定法等不同方法鉴别同一种供试品，综合做出判别。普通每种药品选用综合做出判别。普通每种药品选用24种方法进展鉴别实种方法进展鉴别实验，相互取长补短。验，相互取长补短。； 药物鉴别采用的方法应是专属性强，重现药物鉴别采用的方法应是专属性强，重现性好，灵敏度高，并且简单可行、快速。性好，灵敏度高，并且简单可行、快速。常用的方法有化学法、紫外吸收光谱法、常用的方法有化学法、紫外吸收光谱法、薄层色谱法、红外吸收光谱法等多种方法，薄层色谱法、红外吸收光谱法等多种方法，下面主要引见几种常用的鉴别方法。下面主要引见几种常用的鉴别方法。二、常用鉴别方法二、常用鉴别方法；鉴鉴鉴鉴 别别别别 方方方方 法法法法化学化学化学化学鉴别鉴别法法法法光光光光谱鉴别谱鉴别法法法法生物学法生物学法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法纸色谱鉴别法 呈色反响鉴别法呈色反响鉴别法 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 沉淀生成反响鉴别法沉淀生成反响鉴别法 色谱鉴别法色谱鉴别法 气体生成反响鉴别法气体生成反响鉴别法 测定生成物的熔点测定生成物的熔点荧光反响鉴别法荧光反响鉴别法 ；1、特点：化学鉴别法操作简便、快速、实验、特点：化学鉴别法操作简便、快速、实验本钱低，是药物鉴别时最常用的方法。本钱低，是药物鉴别时最常用的方法。2、鉴别根据：根据药物与化学试剂在一定条、鉴别根据：根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反响或官能团反响产生不同颜件下发生离子反响或官能团反响产生不同颜色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论。同荧光，从而做出定性分析结论。一化学鉴别法一化学鉴别法；1干法干法 干法系指将供试品加适当试剂在规定的温度干法系指将供试品加适当试剂在规定的温度条件下普通是高温进展实验，观测此时条件下普通是高温进展实验，观测此时所发生的特异景象。所发生的特异景象。 常用的方法有焰色实验和加热分解实验。常用的方法有焰色实验和加热分解实验。3 3、类型：根据实验条件的不同化学鉴别法、类型：根据实验条件的不同化学鉴别法可分为干法和湿法两种类型。可分为干法和湿法两种类型。；l 焰色实验：利用某些元素所具有的特异焰色，焰色实验：利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。可鉴别它们为哪一类盐类药物。l 方法为：取铂丝，用盐酸潮湿后，蘸取供试方法为：取铂丝，用盐酸潮湿后，蘸取供试品，在无色火焰中熄灭，使火焰显出特殊的品，在无色火焰中熄灭，使火焰显出特殊的颜色。颜色。l 例如：钠为鲜黄色，钾为紫色。例如：钠为鲜黄色，钾为紫色。l 在临床运用的青霉素类及头孢菌素类药物在临床运用的青霉素类及头孢菌素类药物大多为其钠盐或钾盐，鉴别时利用钠、钾盐大多为其钠盐或钾盐，鉴别时利用钠、钾盐的焰色反响。的焰色反响。；l 加热分解：在适当的温度条件下，加热使供加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。试品分解，生成有特殊气味的气体。l 例如：舒林酸的加热分解取本品约例如：舒林酸的加热分解取本品约15mg,置试管中置试管中,小火加热数分钟，产生小火加热数分钟，产生刺激性的二氧化硫气体刺激性的二氧化硫气体,并能使潮湿的碘并能使潮湿的碘-淀淀粉试纸蓝色消褪。粉试纸蓝色消褪。；2 2湿法湿法 湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进展反响，发生易于观测的于一定条件下进展反响，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。；l 呈色反响呈色反响鉴别法：法：l 系指供系指供试品溶液中参与适当的品溶液中参与适当的试剂溶液，溶液，在一定条件下在一定条件下进展反响，生成易于展反响，生成易于观测的有的有色色产物。物。l 常用的反响常用的反响类型有：型有：l 三三氯化化铁呈色反响呈色反响 酚酚羟基或水解基或水解后后产生酚生酚羟；l 异异羟肟酸酸铁反响反响 多多为芳酸及其芳酸及其酯类、酰胺胺类；l 茚三三酮呈色反响呈色反响 氨基酸及氨基糖氨基酸及氨基糖苷苷类；l 重氮重氮- -巧合巧合显色反响色反响 芳伯氨基或能芳伯氨基或能产生芳伯氨基；生芳伯氨基；l 氧化复原氧化复原显色反响及其他色反响及其他颜色反响。色反响。；l 沉淀生成反响沉淀生成反响鉴别法法l常用的反响有：常用的反响有：l 与重金属离子的沉淀反响在一定条件下，与重金属离子的沉淀反响在一定条件下，药物和重金属离子反响，生成不同方式的沉物和重金属离子反响，生成不同方式的沉淀；淀；l 与硫与硫氰化化铬铵雷氏雷氏盐的沉淀反响多的沉淀反响多为生物碱及其生物碱及其盐，具有芳香，具有芳香环的有机碱及其的有机碱及其盐；l 其他沉淀反响。其他沉淀反响。；l 荧光反响光反响鉴别法：法：l 常用的常用的荧光光发射方式有射方式有l 药物本身可在可物本身可在可见光下光下发射射荧光；光；l 药物溶液加硫酸使呈酸性后，可物溶液加硫酸使呈酸性后，可见光下光下发射射荧光；光；l 药物和溴反响后，于可物和溴反响后，于可见光下光下发射出射出荧光；光；l 药物和物和间苯二酚反响后，苯二酚反响后，发射出射出荧光及光及药物物经其他反响后，其他反响后，发射射荧光。光。 ；l气体生成反响气体生成反响鉴别法法l 大多数的胺大多数的胺铵类药物、物、酰脲类药物物以及某些以及某些酰胺胺类药物，可物，可经强碱碱处置后，加置后，加热，产生氨胺气；生氨胺气；l 化学构造中含硫的化学构造中含硫的药物，可物，可经强酸酸处置置后，加后，加热，发生硫化生硫化氢气体硫气体硫喷妥；妥；l 含碘有机含碘有机药物物经直火加直火加热，可生成紫色，可生成紫色碘蒸气；碘蒸气；l 含醋酸含醋酸酯和乙和乙酰胺胺类药物，物，经硫酸水解硫酸水解后，加乙醇可后，加乙醇可产生乙酸乙生乙酸乙酯的香味。的香味。；1 1紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法UV-VisUV-Vis是药典中常是药典中常用的一种药品鉴别方法，鉴别时普通采用对比用的一种药品鉴别方法，鉴别时普通采用对比法，即按规定的方法配制供试品溶液与对照品法，即按规定的方法配制供试品溶液与对照品溶液，经过对比吸收光谱的特征数据、吸收度溶液，经过对比吸收光谱的特征数据、吸收度或吸收系数、吸收光谱的一致性等进展鉴别。或吸收系数、吸收光谱的一致性等进展鉴别。二仪器鉴别法二仪器鉴别法；1测定最大吸收波长及不同波长的吸收度比值。例如：丙酸倍氯米松，取本品精细称定，加乙醇溶解并定量稀释成浓度为20g/ml的溶液，依法测定，在239nm处有最大吸收，吸收度为0.570.60；在239nm与263nm波优点的吸收度比值应为2.252.45。紫外紫外- -可见分光光度法运用时，可见分光光度法运用时， 主要有以下几种方式：主要有以下几种方式：；2 2测定吸收系数。测定吸收系数。 药品在一定波长下的吸收系数，可用于药品药品在一定波长下的吸收系数，可用于药品的鉴别。的鉴别。 例如：甲砜霉素，取本品精细称定，加水溶例如：甲砜霉素，取本品精细称定，加水溶解并定量稀释成浓度为解并定量稀释成浓度为200200g/mlg/ml的溶液，依的溶液，依法测定，在法测定，在266nm266nm和和276nm276nm处有最大吸收，吸处有最大吸收，吸收系数分别为收系数分别为25252828和和21.521.523.523.5；取上述；取上述供试品溶液供试品溶液1ml1ml，加水稀释成，加水稀释成20ml20ml后，在后，在224nm224nm处有最大吸收，吸收系数为处有最大吸收，吸收系数为370370400400。；3 3对比吸收度或吸收系数的比值。对比吸收度或吸收系数的比值。 取不同吸收峰或吸收谷处的吸收度的比值作取不同吸收峰或吸收谷处的吸收度的比值作为鉴别的根据。由于溶液浓度和吸收池厚度为鉴别的根据。由于溶液浓度和吸收池厚度均一样，因此用此法可消除浓度和厚度的影均一样，因此用此法可消除浓度和厚度的影响。响。 例如例如: :维生素维生素B12B12的鉴别，的鉴别， 20212021年版规定年版规定361nm361nm处的吸收度与处的吸收度与278nm278nm处的吸处的吸收度比值应为收度比值应为1.701.701.881.88，361nm361nm处的吸收处的吸收度与度与550nm550nm处的吸收度比值应为处的吸收度比值应为3.153.153.453.45。； 4 4对比吸收光谱的一致性。对比吸收光谱的一致性。 用上述几种方法鉴别时，无法发现吸收曲用上述几种方法鉴别时，无法发现吸收曲线其他部分的差别。必要时可将浓度一样线其他部分的差别。必要时可将浓度一样的试样与规范品在同一条件下分别扫描其的试样与规范品在同一条件下分别扫描其吸收光谱，对比其一致性；也可利用文献吸收光谱，对比其一致性；也可利用文献中的规范图谱对照。中的规范图谱对照。；图图4-1 4-1 连翘甙的紫外吸收图谱连翘甙的紫外吸收图谱；l 特点：红外吸收光谱法特点：红外吸收光谱法IRIR是一种专属性很强、是一种专属性很强、运用广泛固体、液体、气体样品的鉴别方法。运用广泛固体、液体、气体样品的鉴别方法。l 作用：主要用于组成单一、构造明确的原料药鉴别，作用：主要用于组成单一、构造明确的原料药鉴别，特别是构造复杂、用化学方法不易鉴别的药物。特别是构造复杂、用化学方法不易鉴别的药物。2 2红外吸收光谱法红外吸收光谱法 ；l 鉴别方法：采用规范图谱对比法，即在药典规鉴别方法：采用规范图谱对比法，即在药典规定的条件下测定供试品的图谱，然后与定的条件下测定供试品的图谱，然后与对照。对照。l 对照时普通先看最强峰的吸收位置、外形、数对照时普通先看最强峰的吸收位置、外形、数目等能否一致，然后再检查中等强度缝和弱吸收目等能否一致，然后再检查中等强度缝和弱吸收峰能否对应，假设供试品的红外光吸收图谱与对峰能否对应，假设供试品的红外光吸收图谱与对照品的图谱完全一致，普通可以为是同一种化合照品的图谱完全一致，普通可以为是同一种化合物。物。； 为了确保鉴别结果准确无误，药典普通不单为了确保鉴别结果准确无误，药典普通不单独用本法进展鉴别，常与其他理化方法结独用本法进展鉴别，常与其他理化方法结合进展鉴别。合进展鉴别。 如：如： 20212021年版二部苯酚鉴年版二部苯酚鉴别项下规定：取本品别项下规定：取本品0.1g0.1g，加水，加水10ml10ml溶解溶解后，照下述方法实验。后，照下述方法实验。；1 1取溶液取溶液5ml5ml，加三氯化铁试液，加三氯化铁试液1 1滴，即显滴，即显蓝紫色。蓝紫色。2 2取溶液取溶液5ml5ml，加溴试液，即生成瞬即溶，加溴试液，即生成瞬即溶解的白色沉淀，但溴试液过量时，即生成解的白色沉淀，但溴试液过量时，即生成耐久的沉淀。耐久的沉淀。3 3本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱光谱集光谱集240240图一致。图一致。；图图4-2 4-2 苯酚的红外光吸收谱图苯酚的红外光吸收谱图； 薄薄层层色色谱谱法法TLCTLC是是将将细细粉粉状状的的吸吸附附剂剂或或载载体体涂涂布布于于一一块块具具有有光光洁洁外外表表的的玻玻璃璃板板、塑塑料料片片或或铝铝基基片片上上，构构成成以以均均匀匀薄薄层层厚厚度度0.250.251mm1mm, ,待待点点样样、展展开开后后，各各组组分分在在薄薄层层上上得得到到彼彼此此分分别别的的方方法法，也也是是目目前药典中收载最多的药品鉴别方法之一。前药典中收载最多的药品鉴别方法之一。3 3薄层色谱法薄层色谱法 ；l 鉴鉴别别原原理理：同同一一种种药药物物在在同同样样条条件件下下的的薄薄层层色色谱谱行行为为是是一一样样的的, ,依依此此可可以以鉴鉴别别药药物物及及其制剂的真伪。其制剂的真伪。l鉴鉴别别时时将将供供试试品品和和对对照照品品按按中中国国药药典典规规定定，用用同同种种溶溶剂剂配配成成同同样样浓浓度度的的溶溶液液，在在同同一一薄薄层层板板上上点点样样、展展开开、显显色色，供供试试品品所所显显主主斑斑点点的的颜颜色色、位位置置应应与与对对照照品品的的主主斑斑点点一样。一样。； 高高效效液液相相色色谱谱法法HPLCHPLC是是近近年年来来药药物物分分析析领领域域中中运运用用最最广广泛泛的的分分别别分分析析技技术术，广广泛泛用于药品的含量测定和真伪鉴别。用于药品的含量测定和真伪鉴别。4 4高效液相色谱法高效液相色谱法 ；高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进展分别测流动相泵入装有填充剂的色谱柱进展分别测定的色谱方法，用其进展药品鉴别时，普通定的色谱方法，用其进展药品鉴别时，普通规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进展实验，根据供试品和对照品色谱主条件进展实验，根据供试品和对照品色谱主峰保管时间峰保管时间tRtR的一致性进展判别。图的一致性进展判别。图4-34-3、图、图4-44-4。；图图4-3 4-3 绿原酸规范品色谱图绿原酸规范品色谱图 图图4-4 4-4 样品色谱图样品色谱图；性状项和物理常数确认性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的实验鉴别项下规定的实验 原原料料药药鉴鉴别别制制剂鉴别鉴别实验的工程鉴别实验的工程 Test items ；性性 状状 DescriptionDescription定义：定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。度和物理常数等。外 观溶解度物理常数；外外观：指：指药物的聚集形状、晶型、色物的聚集形状、晶型、色泽以及臭、以及臭、味等性味等性质。 如二如二巯基丁二基丁二钠的描画的描画为“本品本品为白色至白色至微黄色的粉末；有微黄色的粉末；有类似蒜的特臭。似蒜的特臭。 溶解度：一定程度上反映了溶解度：一定程度上反映了药品的品的纯度。度。药品在品在不同溶不同溶剂中的溶解性能用中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶来描略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶来描画。画。物理常数：反映其物理常数：反映其纯杂程度。程度。药典收典收载的物理常的物理常数包括：相数包括：相对密度、密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸折光率、黏度、酸值、皂化、皂化值、羟值、碘、碘值、吸、吸收系数。收系数。 性性 状状 DescriptionDescription；熔熔 点点性 状-固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度 物理常数物理常数；比比旋旋度度：在在一一定定波波长长与与温温度度下下，偏偏振振光光透透过过长长1dm1dm且且每每1ml1ml中中含含有有旋旋光光性性物物质质1g1g的的溶溶液液时时测测得得的旋光度。用的旋光度。用 表示。表示。吸吸收收系系数数：在在给给定定的的波波长长、溶溶剂剂和和温温度度等等条条件件下下，吸吸光光物物质质在在单单位位浓浓度度、单单位位液液层层厚厚度度时时的的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是吸收度称为吸收系数。中国药典收载是 。 这这两两种种物物理理常常数数可可用用以以区区别别药药品品、检检查查纯纯度度或测定制剂的含量。或测定制剂的含量。 性 状-物理常数物理常数在一定波长下，溶液浓度为在一定波长下，溶液浓度为1%1%W/VW/V，厚度为，厚度为1cm1cm时的吸收度时的吸收度；依依 据：据： 根据某一类药物的化学构造或理化性质特征，根据某一类药物的化学构造或理化性质特征，经过化学反响来鉴别药物的真伪。经过化学反响来鉴别药物的真伪。 中国药典附录收载普通鉴别实验：中国药典附录收载普通鉴别实验： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐 无机酸盐无机酸盐General identification testGeneral identification testGeneral identification test普通鉴别实验普通鉴别实验；依依 据：据： 根据每一种根据每一种药物化学构造的差物化学构造的差别及其所引起的物理化学特性的不同，及其所引起的物理化学特性的不同，选用用某些特有的灵敏定性反响，来某些特有的灵敏定性反响，来鉴别药物的物的真真伪。如四氮如四氮唑法法: C17: C17位上有位上有-醇醇酮基的基的药物物, ,如皮如皮质激素分析。激素分析。Specific identification testSpecific identification testSpecific identification test专属鉴别实验专属鉴别实验；比较：比较：普通鉴别实验普通鉴别实验 - - 以某些类别药物的共同化学结以某些类别药物的共同化学结构为根据，根据其一样的理化性质进展药物真伪的构为根据，根据其一样的理化性质进展药物真伪的鉴别，以区别不同类别的药物。鉴别，以区别不同类别的药物。专属鉴别实验专属鉴别实验 - - 在普通鉴别实验的根底上，利在普通鉴别实验的根底上，利用各种药物的化学构造差别来鉴别药物，以区别同用各种药物的化学构造差别来鉴别药物，以区别同类药物或具有一样化学构造部分的各个药物单体。类药物或具有一样化学构造部分的各个药物单体。；