第八章第八章病原学诊断与防病原学诊断与防治治n第一节细菌学诊断n一、病原菌检测一、病原菌检测n1.标本标本n标本采集与送检的原则标本采集与送检的原则：n（1）据据不不同同疾疾病病以以及及疾疾病病的的不不同同时时期期采采集集不同标本不同标本n（2）严格无菌操作，避免标本被污染）严格无菌操作，避免标本被污染n（3）尽尽可可能能在在疾疾病病早早期期以以及及抗抗菌菌药药物物使使用用前前采集标本采集标本n（4）采采集集的的标标本本必必须须尽尽快快送送检检，大大多多数数细细菌标本可以冷藏送检。菌标本可以冷藏送检。n（5）标本作好标记。）标本作好标记。标本采集与送检的原则标本采集与送检的原则n2.细菌形态与结构检查细菌形态与结构检查n（1）显微镜放大法）显微镜放大法n普通光镜普通光镜,电子显微镜等电子显微镜等n（2）染色法）染色法n染色剂与细菌细胞质的结合。染色剂与细菌细胞质的结合。n最常用的染色剂是最常用的染色剂是盐类盐类。n3.分离和鉴定分离和鉴定n鉴定的主要内容有：鉴定的主要内容有：n培培养养特特征征、形形态态特特征征、生生化化反反应应、血血清清学学鉴鉴定定、动动物物试验、药物敏感试验试验、药物敏感试验n4.病原菌抗原的检测病原菌抗原的检测n常用的细菌学诊断的免疫学技术有：常用的细菌学诊断的免疫学技术有：n沉沉淀淀反反应应、协协同同凝凝集集试试验验、免免疫疫荧荧光光法法、对对流流免免疫疫电电泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。n5.其他检测法其他检测法n二、血清学诊断二、血清学诊断n用用已知抗原已知抗原检测检测病人血清或其它体液中病人血清或其它体液中未知未知抗体抗体及其量的变化，可作为感染性疾病的辅及其量的变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。助诊断。n第二节第二节病毒学诊断病毒学诊断n目目前前常常用用的的病病毒毒学学诊诊断断方方法法包包括括病病毒毒的的分分离离鉴鉴定定、病病毒毒的的血血清清学学检检查查、病病毒毒蛋蛋白白和和核核酸酸的检测。的检测。n一、标本的采取与送检一、标本的采取与送检n原则：原则：n1.对对本本身身带带有有杂杂菌菌（如如咽咽拭拭子子、粪粪便便）或或易易受受污污染染的的标标本本，要要进进行行病病毒毒分分离离培培养养，应应使使用用抗抗生素。生素。n2.标本标本应低温保存应低温保存并并尽快送检尽快送检。n3.血血清清学学诊诊断断标标本本的的采采取取应应在在发发病病初初期期和和病病后后23w内内各各取取1份份血血清清以以便便对对比比双双份份血血清清抗抗体体效效价的动态变化。价的动态变化。n二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定n（一）病毒的分离（一）病毒的分离n1.动物接种动物接种最早的病毒分离方法最早的病毒分离方法n2.鸡胚培养鸡胚培养n按按病病毒毒种种类类不不同同接接种种于于不不同同部部位位如如绒绒毛毛尿尿囊囊膜膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等。尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊等。n3.细胞培养细胞培养n（1）从生长方式可分）从生长方式可分n单层细胞和悬浮细胞培养单层细胞和悬浮细胞培养n（2）从来源、染色体特征及传代次数分）从来源、染色体特征及传代次数分n 原代细胞原代细胞n来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞来源于动物、鸡胚或引产人胚组织细胞n 二倍体细胞二倍体细胞n细细胞胞在在体体外外分分裂裂50100代代后后仍仍保保持持2倍倍染染色色体数目体数目的的单层细胞单层细胞。n 传代细胞系传代细胞系n多多由由癌癌细细胞胞或或2倍倍体体细细胞胞突突变变而而来来，能能在在体体外外持续传代，对病毒的敏感性稳定持续传代，对病毒的敏感性稳定n（3）病毒在培养细胞中增殖的指标）病毒在培养细胞中增殖的指标n 细胞的变化细胞的变化 n细胞病变、多核巨细胞、包涵体细胞病变、多核巨细胞、包涵体n 红细胞吸附红细胞吸附 n红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象n 干扰现象干扰现象n 细胞代谢的变化细胞代谢的变化n（二）病毒的数量与感染性测定（二）病毒的数量与感染性测定n（三）新分离病毒的鉴定（三）新分离病毒的鉴定n病病毒毒核核酸酸类类型型的的鉴鉴定定、理理化化性性状状的的检检测测、形形态态学观察、血清学鉴定和基因测序和生物对比学观察、血清学鉴定和基因测序和生物对比n三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断n中中和和试试验验、补补体体结结合合试试验验、血血凝凝抑抑制制试试验验、凝凝胶免疫扩散试验胶免疫扩散试验n四、病毒感染的四、病毒感染的快速诊断快速诊断n（一）形态学检查（一）形态学检查n电镜和免疫电镜检查、普通光镜（查包涵体）电镜和免疫电镜检查、普通光镜（查包涵体）n（二）病毒蛋白抗原检查（二）病毒蛋白抗原检查n免免疫疫荧荧光光技技术术、固固相相放放射射免免疫疫测测定定、酶酶免免疫疫技技术术n（三）特异性（三）特异性IgMIgM抗体的检测抗体的检测n（四）四）检测病毒核酸检测病毒核酸n1. 1. 核酸杂交技术核酸杂交技术 n斑斑点点杂杂交交、细细胞胞内内原原位位杂杂交交、DNADNA印印迹迹杂杂交交、RNARNA印迹杂交印迹杂交n2.核酸扩增技术核酸扩增技术nPCR、连接酶链反应、反转录、连接酶链反应、反转录PCRn3.基因芯片技术基因芯片技术n第三节第三节真菌学诊断真菌学诊断n（一）标本的采集（一）标本的采集n浅部感染真菌的检查：浅部感染真菌的检查：n深部感染真菌的检查：深部感染真菌的检查：n标标本本采采集集要要注注意意：标标本本量量要要足足，标标本本应应新新鲜鲜，严格无菌操作严格无菌操作n（二）病原性真菌的检查与鉴定二）病原性真菌的检查与鉴定n1.直接镜检直接镜检不染色标本、染色标本不染色标本、染色标本n2.分离培养分离培养n常用沙氏培基和改良沙氏培基（常用沙氏培基和改良沙氏培基（24w）n临床多用试管培养、十分重视小培养。临床多用试管培养、十分重视小培养。n3.动物实验动物实验n4.皮肤超敏反应试验皮肤超敏反应试验n（三）（三）真菌学快速诊断真菌学快速诊断n血清学试验血清学试验n核酸的检测核酸的检测n真菌毒素的检测真菌毒素的检测n第四节第四节特异性预防与治疗特异性预防与治疗（略）（略）n一、人工主动免疫一、人工主动免疫n（一）疫苗（一）疫苗n第一代疫苗：死疫苗、活疫苗第一代疫苗：死疫苗、活疫苗n第二代疫苗：亚单位疫苗、基因工程疫苗第二代疫苗：亚单位疫苗、基因工程疫苗n第三代疫苗：第三代疫苗：DNA疫苗（基因疫苗或核酸疫苗疫苗（基因疫苗或核酸疫苗n（二）类毒素（二）类毒素n二、人工被动免疫二、人工被动免疫n1.抗毒素抗毒素n2.抗菌血清抗菌血清n3.胎盘丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白n4.其他免疫制剂其他免疫制剂n三、细菌感染的治疗（略）三、细菌感染的治疗（略）n四、病毒感染的治疗（略）四、病毒感染的治疗（略）n五、真菌感染的治疗（略）五、真菌感染的治疗（略）