梅毒实验室诊断技术梅毒实验室诊断技术 梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软下疳软下疳软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病软下疳软下疳软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿50-6050-6050-6050-60年代年代年代年代经典性病经典性病经典性病经典性病80-9080-9080-9080-90年代年代年代年代监测性病监测性病监测性病监测性病目目目目 前前前前传染法报告病例传染法报告病例传染法报告病例传染法报告病例 监测性病监测性病监测性病监测性病梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病沙眼衣原体感染沙眼衣原体感染沙眼衣原体感染沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣 我国主要流行的性传播疾病（性病）我国主要流行的性传播疾病（性病）沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体: 30%: 30%: 30%: 30%50%50%50%50%生殖支原体生殖支原体生殖支原体生殖支原体: 10%: 10%: 10%: 10%40%40%40%40% 其它其它其它其它: 20%: 20%: 20%: 20%30%30%30%30%梅毒梅毒梅毒梅毒淋病淋病淋病淋病HIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDSHIV/AIDS 1991-2012年我国梅毒年我国梅毒报告发病趋势报告发病趋势淋病全部梅毒发病率：1/10万一期与二期梅毒2012年与2011年相比：全部梅毒增长：4.41%一期与二期梅毒：0.33%2012年梅毒：44.862万例 1995-2012 梅毒分期梅毒分期/ /分类分类报告发病率报告发病率隐性梅毒一期梅毒二期梅毒发病率：1/10万三期梅毒2012年与2011年相比：全部梅毒增长：4.41%一期梅毒：0.44%二期梅毒：1.63%三期梅毒：9.49%隐性梅毒：8.11%胎传梅毒：6.15%2012年梅毒发病地区分布卫生部于卫生部于20102010年年6 6月月3 3日下日下发了关于发了关于中国预防与控中国预防与控制梅毒规划（制梅毒规划（2010-20202010-2020年）年）卫生部卫生部20122012年年1111月月2323日下日下发发性病防治管理办法性病防治管理办法6卫生部下发的政策卫生部下发的政策/ /规划文件规划文件梅毒研究的历史15301530年意大利医师弗拉卡斯托罗年意大利医师弗拉卡斯托罗( (GirolamoGirolamo FracastoroFracastoro) )首先命名梅毒，论述了其病因、病理及首先命名梅毒，论述了其病因、病理及防治防治19051905年德国动物学家绍丁（年德国动物学家绍丁（Fritz Fritz SchaudinnSchaudinn）与皮）与皮肤病学家霍夫曼（肤病学家霍夫曼（E.HoffmannE.Hoffmann），发明了暗视野显），发明了暗视野显微镜，共同发现了梅毒螺旋体微镜，共同发现了梅毒螺旋体19981998年梅毒螺旋体全基因组测序年梅毒螺旋体全基因组测序梅毒螺旋体的特征 小而纤细的螺旋状微生物小而纤细的螺旋状微生物, ,螺螺旋整齐，数目固定旋整齐，数目固定 长长5 52020 mm，粗细，粗细0.20.2 m,m,折折光性强，较其他螺旋体亮光性强，较其他螺旋体亮有有6-126-12个规则的螺旋个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕，有鞭毛为两层膜所围绕，有鞭毛运动缓慢而有规律，有三种运运动缓慢而有规律，有三种运动方式动方式 围绕其长轴旋转运动围绕其长轴旋转运动 伸缩其螺旋间距离移动伸缩其螺旋间距离移动 弯曲扭动如蛇行弯曲扭动如蛇行梅毒螺旋体的特征属于密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种属于密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种最适生存温度是最适生存温度是3737，离开人体很快死，离开人体很快死亡亡煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂如双氧水、酒精等很容易将其杀灭如双氧水、酒精等很容易将其杀灭人是梅毒螺旋体的唯一自然宿主人是梅毒螺旋体的唯一自然宿主梅毒螺旋体不能在无活细胞的培养基中梅毒螺旋体不能在无活细胞的培养基中生长繁殖生长繁殖先天性梅毒新生儿先天性梅毒新生儿及脐带切片及脐带切片DFADFA图像图像获得性梅毒分期梅毒螺旋体梅毒螺旋体 破损的皮肤及粘膜破损的皮肤及粘膜 2 24 4周潜伏期周潜伏期 局部大量繁殖局部大量繁殖 硬下疳（传染性极强）硬下疳（传染性极强） 经经1 12 2月月 自行消失自行消失 附近淋巴结附近淋巴结 血液播散血液播散 全身组织和器官全身组织和器官 二期梅毒二期梅毒 三期梅毒三期梅毒 心血管、神经等损害心血管、神经等损害 梅毒的实验室诊断梅毒的实验室诊断病原学检测病原学检测血清学检测血清学检测 常用的梅毒检测方法常用的梅毒检测方法病原学检查 原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、硬下疳、硬下疳、硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，视野显微镜下，视野显微镜下，视野显微镜下，光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。式进行检测。式进行检测。式进行检测。 方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法。法。法。法。其它病原学检查核酸检测核酸检测：先天梅毒、潜伏梅毒、神经梅：先天梅毒、潜伏梅毒、神经梅毒、早期梅毒、艾滋病合并梅毒感染者。毒、早期梅毒、艾滋病合并梅毒感染者。 损伤部位的分泌物、血清、脑脊液、羊水和损伤部位的分泌物、血清、脑脊液、羊水和组织等标本均可用于组织等标本均可用于PCRPCR检测梅毒螺旋体检测梅毒螺旋体 。体外培养：体外培养：利用家兔对梅毒螺旋体的易感利用家兔对梅毒螺旋体的易感性，把梅毒螺旋体注射于成年新西兰白兔性，把梅毒螺旋体注射于成年新西兰白兔睾睾丸丸内，观察有无感染亦象。内，观察有无感染亦象。RITRIT是经典的梅是经典的梅毒诊断方法，由于其费用高、检查时间长等毒诊断方法，由于其费用高、检查时间长等弊病目前仅用于科学研究弊病目前仅用于科学研究 。病原学检查的临床意义1.1.病原学方法直接镜检到梅毒螺旋病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。快速、方便、易操作的特点。2.2.螺旋体检查是诊断螺旋体检查是诊断早期早期现症梅毒现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。传染源都有十分重要的意义。3.3.如未见到梅毒螺旋体，并不能排如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。除患梅毒的可能性。梅毒感染后的血清学反应梅毒感染后的血清学反应抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体：梅毒螺旋体感染人体，：梅毒螺旋体感染人体，在在3 34 4周产生抗类脂抗原的抗体（周产生抗类脂抗原的抗体（反应反应素素）。这些抗体主要是）。这些抗体主要是IgGIgG和和IgMIgM型混合型混合抗体。这种抗体仅能供梅毒血清学诊断，抗体。这种抗体仅能供梅毒血清学诊断，本身无保护作用。本身无保护作用。未经治疗的患者，其血清内的反应素可未经治疗的患者，其血清内的反应素可长期存在。经适当治疗后，抗体可以逐长期存在。经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性，因此可用于疗效观渐减少至转为阴性，因此可用于疗效观察及判愈。察及判愈。 感染梅毒后首先产生感染梅毒后首先产生TP TP IgMIgM抗体，感染后抗体，感染后2 2周周即可检出，并且只要有活的梅毒螺旋体存在，即可检出，并且只要有活的梅毒螺旋体存在，不断予以抗原刺激，其不断予以抗原刺激，其TP TP IgMIgM将会维持在一定将会维持在一定的水平。的水平。经治疗经治疗TP TP IgMIgM抗体阴转在一期梅毒为抗体阴转在一期梅毒为3 3个月，个月， 二期梅毒为二期梅毒为9 9个月，个月， 潜伏梅毒为潜伏梅毒为2 2年。年。TP TP IgMIgM 的消失，提示体内没有活的梅毒螺旋的消失，提示体内没有活的梅毒螺旋体存在，可以推断已经丧失传染性，可以继续体存在，可以推断已经丧失传染性，可以继续随访或判愈。再感染时又出现阳性，因此随访或判愈。再感染时又出现阳性，因此IgMIgM抗体的存在是活动性梅毒的表现。抗体的存在是活动性梅毒的表现。梅毒感染后的血清学反应梅毒感染后的血清学反应梅毒感染后的血清学反应梅毒感染后的血清学反应感染梅毒感染梅毒4 4周左右产生周左右产生 TP TP IgGIgG抗体，抗体，即使经过足量的抗梅毒治疗，梅毒螺即使经过足量的抗梅毒治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，旋体抗原消失后很长时间，IgGIgG抗体仍抗体仍可以通过记忆细胞的作用继续产生，可以通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终身在血清中可测出。甚至终身在血清中可测出。梅毒感染后的血清学反应梅毒感染后的血清学反应胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（晚期（6 69 9个月）已能合成个月）已能合成IgMIgM抗体，抗体，出生后第出生后第3 3个月开始形成个月开始形成IgGIgG抗体。抗体。母亲母亲IgMIgM抗体不能通过胎盘，而抗体不能通过胎盘，而IgGIgG抗抗体能通过，如在患儿血清中测出体能通过，如在患儿血清中测出 TP TP IgMIgM，是诊断先天梅毒的有力证，是诊断先天梅毒的有力证。梅毒螺旋体IgM抗体小结梅毒最早产生梅毒最早产生IgMIgM抗体抗体早期梅毒、早期梅毒、再感染再感染IgM不能通过胎盘屏障、血脑屏障不能通过胎盘屏障、血脑屏障 新生儿血测到新生儿血测到IgMIgM抗体抗体 先天感染先天感染 脑脊液测到脑脊液测到IgMIgM抗体抗体 活动性神经梅活动性神经梅毒毒梅毒血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验分为四种试验：分为四种试验： 1 1、性病研究实验室玻片试验（、性病研究实验室玻片试验（VDRL)VDRL) ：试剂需现配：试剂需现配现用，且要在显微镜下观察结果，故国内实验室很少采现用，且要在显微镜下观察结果，故国内实验室很少采用。但用。但VDRLVDRL是诊断神经性梅毒最特异的血清学方法是诊断神经性梅毒最特异的血清学方法 2 2、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USR)USR)：试剂无需现配现：试剂无需现配现用，但仍要在显微镜下观察结果，现已很少使用用，但仍要在显微镜下观察结果，现已很少使用 3 3、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)(RPR)：在特制的纸：在特制的纸片上进行，加入一定量特制的片上进行，加入一定量特制的炭粉炭粉，可使抗原抗体出现，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果凝集，用肉眼可观察结果 4 4、甲苯胺红不加热试验（、甲苯胺红不加热试验（TRUST)TRUST)：在试剂中以红色：在试剂中以红色的的甲苯胺红甲苯胺红颗粒代替黑色的炭粉颗粒，使结果更易于观颗粒代替黑色的炭粉颗粒，使结果更易于观察察性病研究实验室玻片试验（VDRL试验） 0.03%0.03%心磷脂心磷脂 、0.21%0.21%卵磷脂和卵磷脂和 0.90%0.90%胆胆 固醇组成固醇组成 该抗原需新鲜配制不能保存该抗原需新鲜配制不能保存 待检血清需灭活待检血清需灭活 主要用于脑脊液检查主要用于脑脊液检查排除血液污染的情况下可诊断神经梅毒排除血液污染的情况下可诊断神经梅毒神经性梅毒的脑脊液细胞计数和蛋白水平通神经性梅毒的脑脊液细胞计数和蛋白水平通常升高。常升高。非梅毒螺旋体抗原血清试验所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样原基本成分都一样, ,其基本成分是其基本成分是 心磷脂心磷脂：与反应素结合：与反应素结合 卵磷脂卵磷脂：加强心磷脂的抗原性：加强心磷脂的抗原性 胆固醇胆固醇：增强抗原的敏感性：增强抗原的敏感性抗原抗体结合形成复合物凝集成网抗原抗体结合形成复合物凝集成网状沉淀。状沉淀。VDRL结果阴性阴性弱阳性弱阳性强阳性强阳性不加热血清反应素试验（USR试验） 是是VDRLVDRL试验的改良试验的改良 抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇 还有乙二胺四醋酸还有乙二胺四醋酸(EDTA)(EDTA)，使抗，使抗 不会变质可不会变质可长期保存长期保存能维持一年能维持一年 含有氯化胆碱，对血清能起到化学含有氯化胆碱，对血清能起到化学 灭活的作用灭活的作用不必加热灭活不必加热灭活 制成试剂盒，但制成试剂盒，但仍然要在显微镜下仍然要在显微镜下 观察结果观察结果快速血浆反应素环状卡片试验（RPR试验）在在USRUSR试剂成分的基础上加入试剂成分的基础上加入黑黑色碳颗粒色碳颗粒作为沉淀的指示物作为沉淀的指示物 用白色的硬纸片替代玻片用白色的硬纸片替代玻片血清不需要灭活血清不需要灭活不需要显微镜观测结果不需要显微镜观测结果可作定量试验可作定量试验有现成的试剂盒，携带方便有现成的试剂盒，携带方便操作简单操作简单, ,价格便宜价格便宜试验的结果可长期保存试验的结果可长期保存甲苯胺红试验(TRUST)其原理和成分与其原理和成分与RPRRPR试验相同试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 其余的特点均与其余的特点均与RPRRPR相同相同RPR结果TRUST结果非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷及优点的缺陷及优点缺点：缺点：1 1、特异性：在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性、特异性：在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性假阳性反应反应 2 2、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，因此非梅毒螺旋体抗原血清试验对抗体，因此非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒的漏检率较高一期梅毒的漏检率较高。RPRRPR或或TRUSTTRUST有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的量引起的“ “钩状效应钩状效应” ”，1212的二期梅毒病人可出现此现象而发生的二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。此外，假阴性反应。此外，晚期梅毒晚期梅毒反应素转阴率高，再加上这类试验对反应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验进行梅毒筛查时，存在着相隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量的当数量的漏检漏检 优点：优点： 1 1、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的患者往往是梅毒现、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗症感染者，临床上即可开展治疗 2 2、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标降，故可以作为疗效观察的指标 3 3、此类方法价格低廉、此类方法价格低廉临床意义临床意义可用于疗效观察、判定复发及再感染可用于疗效观察、判定复发及再感染适用于普查、婚检、产前检查及其它适用于普查、婚检、产前检查及其它健康体检筛查与普查健康体检筛查与普查鉴别先天性梅毒与反应素血症（由生鉴别先天性梅毒与反应素血症（由生母的反应素通过胎盘至胎儿血中）如母的反应素通过胎盘至胎儿血中）如无感染，生后无感染，生后3 34 4月内可自动转阴。月内可自动转阴。如不减反升可诊断先天梅毒如不减反升可诊断先天梅毒测定非梅毒螺旋体抗原血清测定非梅毒螺旋体抗原血清试验的滴度试验的滴度进行疗效观察进行疗效观察1 1、治疗成功：治疗成功：早期梅毒患者在治疗后早期梅毒患者在治疗后6 6个月内症状消失个月内症状消失且非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有且非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少至少4 4倍倍的下降。晚的下降。晚期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后12241224个月内非梅毒螺个月内非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少旋体抗原血清试验滴度有至少4 4倍的下降倍的下降 2 2、治疗失败：治疗失败：治疗后症状持续或重新出现；治疗后非治疗后症状持续或重新出现；治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了梅毒螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了4 4倍或以上；非倍或以上；非梅毒螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（梅毒螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（1:321:32或以上）或以上）但在六个月内没有达到但在六个月内没有达到4 4倍的下降。抗梅毒治疗失败的病倍的下降。抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并人应考虑合并HIVHIV感染及神经梅毒的可能性感染及神经梅毒的可能性 3 3、血清固定：血清固定：经正规治疗后，梅毒患者非梅毒螺旋体经正规治疗后，梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验一般都会转为阴性，但有抗原血清试验一般都会转为阴性，但有13%13%的病人即使的病人即使经足量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍经足量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍持持续呈低滴度阳性续呈低滴度阳性，这种现象称为血清固定，血清固定患，这种现象称为血清固定，血清固定患者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒血清固定的原因1 1、早期梅毒治疗量不足、治疗不规则、早期梅毒治疗量不足、治疗不规则2 2、梅毒的病期、类型、开始治疗的梅毒的病期、类型、梅毒的病期、类型、开始治疗的梅毒的病期、类型、开始治疗的时间早晚。开始治疗的时间早晚。3 3、曾有过复发或再感染，体内仍有潜在的病灶存在潜、曾有过复发或再感染，体内仍有潜在的病灶存在潜在的病灶存在在的病灶存在4 4、合并有其他疾病、合并有其他疾病5 5、机体内细胞免疫受到抑制、机体内细胞免疫受到抑制 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验1 1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒、原理：用梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2 2、方法：、方法：梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)(TPHA)梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)(TPPA)梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）化学发光试验（化学发光试验（CLIACLIA）梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法- -梅毒快速检测梅毒快速检测 (TP-RT)(TP-RT)荧光密螺旋体抗体吸收试验（荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WBTP-WB）等）等 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)原理：原理： 用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清或血浆中鞣化的羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应优点：优点：该方法比该方法比FTA-ABSFTA-ABS易操作且稳定性好，它的敏感易操作且稳定性好，它的敏感 性除早期梅毒外与性除早期梅毒外与FTA-ABSFTA-ABS相似，对大样本进行批量检相似，对大样本进行批量检测时，测时，TPHATPHA也比也比FTA-ABSFTA-ABS易操作，是国内实验室常用的易操作，是国内实验室常用的梅毒螺旋体确证试验方法梅毒螺旋体确证试验方法不足：不足：由于红细胞具有生物活性，可能产生非特异性凝由于红细胞具有生物活性，可能产生非特异性凝集，且保存时间较短，批间差较大集，且保存时间较短，批间差较大, ,故实际使用中也存在故实际使用中也存在一些问题。目前国内使用的商品化一些问题。目前国内使用的商品化 TPHA TPHA 试剂盒均未通过试剂盒均未通过国家的批批检。国家的批批检。TPPA原理：原理： TPPATPPA的原理与的原理与TPHATPHA基本相同，它以人工合成的基本相同，它以人工合成的 惰性明胶颗粒代替惰性明胶颗粒代替TPHATPHA试验的红细胞作为载体试验的红细胞作为载体 ，是，是TPHATPHA的升级产品。的升级产品。优点：优点： 1 1、试剂稳定，批间差小、试剂稳定，批间差小 2 2、结果判读更为清晰明确、结果判读更为清晰明确 3 3、敏感性和特异性较、敏感性和特异性较TPHATPHA进一步提高进一步提高 4 4、通过了国家的批批检、通过了国家的批批检 不足：结果判定主观，较难实现自动化不足：结果判定主观，较难实现自动化TPPA定性试验定性试验加加TPPA结果TPPATPPA临床意义临床意义敏感性和特异性高，是梅毒的确证敏感性和特异性高，是梅毒的确证 试验。对未经治疗的梅毒的敏感性：试验。对未经治疗的梅毒的敏感性： 一期一期7676，二期，二期100100，潜伏，潜伏9797， 晚期晚期9494。特异性。特异性9999 。一般不会阴转，因此不作为疗效观一般不会阴转，因此不作为疗效观察指标。但部分早期梅毒经有效治察指标。但部分早期梅毒经有效治疗可阴转疗可阴转梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验原理：用经纯化及超声裂解处理的梅原理：用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体为抗原，或重组抗原包被固毒螺旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检测特异性梅毒螺旋体抗体相，检测特异性梅毒螺旋体抗体敏感性可达敏感性可达95%98%95%98%，临床应用前应，临床应用前应参考试剂评价结果及与参考试剂评价结果及与TPPATPPA对照对照双抗原夹心法梅毒螺旋体胶体金试验梅毒螺旋体胶体金试验在试纸条上包被螺旋在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份，体特异性抗原成份，利用免疫渗滤技术，利用免疫渗滤技术，将试纸条插入待测血将试纸条插入待测血清，观察血清与特定清，观察血清与特定抗原成份的反应抗原成份的反应可在可在1010分钟之内得分钟之内得到结果，快速、方便到结果，快速、方便是特异性螺旋体实验是特异性螺旋体实验荧光密螺旋体抗体吸收试验荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS) 原理是将有完整形态的梅毒螺旋体原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经作为抗原，加上经吸收剂吸收剂吸收过的梅吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（加入荧光素（FTICFTIC）标记的羊抗人丙）标记的羊抗人丙球蛋白抗体，与抗梅毒螺旋体抗体结球蛋白抗体，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。的荧光，即为阳性反应。FTA-ABS FTA-ABS IgGIgG抗体抗体及及IgMIgM阳性（阳性（400400）梅毒螺旋体免疫印迹试验通过电泳转移硝酸通过电泳转移硝酸纤维膜抗原条上含纤维膜抗原条上含有梅毒螺旋体的各有梅毒螺旋体的各种成分来确认是否种成分来确认是否感染梅毒。感染梅毒。观察观察15.5KD15.5KD、17KD17KD和和45KD45KD区带区带阳性阳性：15.5KD15.5KD、17KD17KD和和45KD45KD显色显色阴性阴性：15.5KD15.5KD、17KD17KD和和45KD45KD均不均不显色显色可疑可疑：15.5KD15.5KD、17KD17KD和和45KD45KD有一有一个或两个条带出现个或两个条带出现梅毒螺旋体免疫印迹试验梅毒血清学试验的敏感性和特异性如何选择梅毒诊断试剂？如何选择梅毒诊断试剂？ 20122012年非梅毒螺旋体抗原血清学试验用试剂评估结果年非梅毒螺旋体抗原血清学试验用试剂评估结果试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%) 特异性特异性(%) 功效率功效率(%) Kappa值值 科华RPR 96.6 96.3 94.4 0.914英科TRUST 96.6 95.9 96.1 0.907金豪TRUST 95.5 92.6 93.5 0.848荣盛TRUST 91.0 98.6 96.4 0.911万泰TRUST 71.9 100.0 91.8 0.784(2012(2012(2012(2012年评估结果：梅毒螺旋体抗原血清学试验年评估结果：梅毒螺旋体抗原血清学试验年评估结果：梅毒螺旋体抗原血清学试验年评估结果：梅毒螺旋体抗原血清学试验) ) ) ) 方法方法 试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%) (%) 特异性特异性(%) (%) 功效率功效率(%) Kappa(%) Kappa值值 化学发光法 科美发光 96.4 100.0 98.7 0.971 酶免法 万泰ELISA 96.4 100.0 98.3 0.971 现代ELISA 96.4 100.0 98.3 0.971 英科ELISA 95.5 100.0 98.3 0.964 丽珠ELISA 95.5 100.0 98.3 0.964 科卫ELISA 95.5 100.0 98.3 0.964 金豪ELISA 95.5 100.0 98.3 0.964 华大ELISA 95.5 99.0 97.7 0.950 三维 ELISA 94.6 100.0 98.0 0.957 科华ELISA 94.6 100.0 98.0 0.957 免疫层析法 艾博RT 95.5 98.4 97.4 0.943 万泰RT 94.6 99.5 97.7 0.950 日本Determine 93.8 99.0 97.0 0.934 万孚RT 92.9 100.0 97.4 0.942 蓝十字RT 92.9 100.0 97.4 0.943 英科 RT 92.9 99.0 96.7 0.928 伊士RT 92.0 100.0 97.0 0.935 梅毒血清学试验的临床诊断意义血清学试验血清学试验 意意 义义USRUSR TPPATPPA RPRRPR TPHATPHA VDRLVDRL 排除梅毒、一期梅毒的早期排除梅毒、一期梅毒的早期/极晚期梅毒、艾滋病患者合并梅毒极晚期梅毒、艾滋病患者合并梅毒 现症梅毒现症梅毒( (梅毒孕妇所生婴儿除外梅毒孕妇所生婴儿除外) )或治愈的晚期梅毒或治愈的晚期梅毒 生物学假阳性生物学假阳性 早期梅毒治疗后或极早期梅毒、以往感染过梅毒、部分晚期梅毒早期梅毒治疗后或极早期梅毒、以往感染过梅毒、部分晚期梅毒梅毒血清学试验生物学假阳性的常见原因 先天性梅毒的诊断先天性梅毒的诊断先天性梅毒的诊断要结合临床表现、物理检查、影像检查、血清学检查先天性梅毒的诊断要结合临床表现、物理检查、影像检查、血清学检查和直接显微镜检查进行综合判断和直接显微镜检查进行综合判断先天性梅毒的临床症状主要包括鼻音、肝脾肿大、皮损、骨软骨炎等，先天性梅毒的临床症状主要包括鼻音、肝脾肿大、皮损、骨软骨炎等，50%50%的梅毒患儿出生时无异常表现，多数在的梅毒患儿出生时无异常表现，多数在3 3周至周至6 6个月时出现上述症个月时出现上述症状中的一项或几项。可能更晚出现（状中的一项或几项。可能更晚出现（2 2年以后出现）的其它特征有畸型、年以后出现）的其它特征有畸型、耳聋、失明、弱智等耳聋、失明、弱智等由于母体的螺旋体直接进入胎儿的血循环，因此先天性梅毒均直接表现由于母体的螺旋体直接进入胎儿的血循环，因此先天性梅毒均直接表现为二期梅毒为二期梅毒从脐带、胎盘、新生儿皮损处采样，在显微镜下从脐带、胎盘、新生儿皮损处采样，在显微镜下直接检查到梅毒螺旋体直接检查到梅毒螺旋体可确诊断先天性梅毒可确诊断先天性梅毒新生儿的新生儿的抗心磷脂抗体滴度若高于母亲抗心磷脂抗体滴度若高于母亲4 4倍倍，且持续上升且持续上升，可诊断先天，可诊断先天性梅毒（此种情况约占性梅毒（此种情况约占22%22%），但相反的情况却不能排除），但相反的情况却不能排除新生儿新生儿梅毒特异性梅毒特异性IgMIgM抗体抗体检测阳性可诊断先天性梅毒，但阴性则不能检测阳性可诊断先天性梅毒，但阴性则不能排除排除从母体被动获得的梅毒从母体被动获得的梅毒IgGIgG抗体在新生儿体内代谢、清除需要抗体在新生儿体内代谢、清除需要12181218个个月时间，因此通过月时间，因此通过随访排除或确诊先天性梅毒的时间为随访排除或确诊先天性梅毒的时间为1 1年半左右年半左右新生儿梅毒特异性抗体检查阳性，同时脑脊液新生儿梅毒特异性抗体检查阳性，同时脑脊液VDRLVDRL呈阳性或在物理检呈阳性或在物理检查中发现有先天性梅毒的体征，也可推断先天性梅毒查中发现有先天性梅毒的体征，也可推断先天性梅毒两个特殊人群的梅毒诊断两个特殊人群的梅毒诊断老年人老年人: 老年人群（特别是老年人群（特别是80岁以上）的梅毒抗体阳性率要高于其他岁以上）的梅毒抗体阳性率要高于其他人群，但许多梅毒螺旋体抗原血清试验和人群，但许多梅毒螺旋体抗原血清试验和/或非梅毒螺旋体抗或非梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性的老年病例并没有明显的临床症状。这可原血清试验呈阳性的老年病例并没有明显的临床症状。这可能是既往感染或隐性感染的情况，也可能是能是既往感染或隐性感染的情况，也可能是老年患者所患的老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/ /或抗或抗T. T. pallidumpallidum 抗体的交叉抗原导致抗体的交叉抗原导致检测方法的假阳性检测方法的假阳性孕妇孕妇 晚期妊娠时，少数情况下可突然出现梅毒特异性抗体和晚期妊娠时，少数情况下可突然出现梅毒特异性抗体和/或反或反应素阳性，应提醒临床注意既往梅毒感染复发或假阳性的可应素阳性，应提醒临床注意既往梅毒感染复发或假阳性的可能性，并进行随访观察能性，并进行随访观察关于梅毒血清学试验程序的关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）探讨（一）先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPRRPR、TRUSTTRUST等）等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPATPPA、TPHATPHA、ELISAELISA等）进行确认等）进行确认 优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉价格低廉，使梅，使梅 毒检测的成本可以保持在低水平毒检测的成本可以保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差，缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差， 导致临床上易出现导致临床上易出现漏检漏检的情况的情况同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验血清试验 优点：这是从技术上而言的最佳方案优点：这是从技术上而言的最佳方案 缺点：人力和试剂成本较高缺点：人力和试剂成本较高先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试验螺旋体抗原血清试验关于梅毒血清学试验程序的关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）探讨（二） 谢 谢 ！