考试考试6n n1.X1.X、射线的杀菌机理是什么？射线的杀菌机理是什么？n n2.2.氧化剂的杀菌机理是什么？氧化剂的杀菌机理是什么？n n3.3.福尔马林的主要成分是什么？福尔马林的主要成分是什么？n n4.4.乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓度是多少？度是多少？n n5.5.青霉素的抗菌机理是什么？青霉素的抗菌机理是什么？n n6.6.直接计数法的特点是什么？有哪些具直接计数法的特点是什么？有哪些具体方法？体方法？ 4比浊计数法比浊计数法n浊浊细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度n n细细细细菌菌菌菌不不不不完完完完全全全全透透透透光光光光，一一一一定定定定范范范范围围围围内内内内菌菌菌菌溶溶溶溶液液液液的的的的混混混混浊浊浊浊度度度度与与与与菌数量成菌数量成菌数量成菌数量成正比正比（1）制标准曲线（）制标准曲线（ODNo）n n（2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量）测菌液浊度，查图表得出细菌数量浊度仪浊度仪或或721721分光光分光光度仪度仪 （二）间接计数法（二）间接计数法(活菌计数法活菌计数法)n n提问：提问：提问：提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？n n繁殖繁殖n n提问：提问：提问：提问：细菌繁殖的可见现象是什么？细菌繁殖的可见现象是什么？细菌繁殖的可见现象是什么？细菌繁殖的可见现象是什么？n n产生菌落产生菌落产生菌落产生菌落（固体培养基培养）固体培养基培养）固体培养基培养）固体培养基培养）、菌液混浊、菌液混浊、菌液混浊、菌液混浊（液体培养基培养）液体培养基培养）液体培养基培养）液体培养基培养）n n计数原理计数原理：一个一个细菌细菌细菌细菌可繁殖成可繁殖成可繁殖成可繁殖成一个一个菌落菌落菌落菌落或或或或一群细菌一群细菌一群细菌一群细菌. .n n缺点：缺点：缺点：缺点：慢慢慢慢 n n分分分分固体培养法和液体培养法固体培养法和液体培养法无菌水无菌水n n1.1.1.1. 稀释平板计数法稀释平板计数法稀释平板计数法稀释平板计数法固体培养法固体培养法固体培养法固体培养法第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀释第一步：菌样巧妙稀释得到不同得到不同稀释度稀释度 （10-x）菌液菌液菌样被菌样被菌样被菌样被无菌水无菌水无菌水无菌水不同稀不同稀不同稀不同稀释倍率释倍率释倍率释倍率后后后后平板平板平板平板培养图培养图培养图培养图 10-2 10-3 10-4 10-5 各各各各取取取取1 1mlml，均均均均匀匀匀匀涂涂涂涂布布布布于于于于冷冷冷冷固固固固体体体体培培培培养养养养基基基基平平平平板板板板上上上上或或或或与与与与温温温温热热热热液液液液态态态态固固固固体体体体培培培培养养养养基基基基混合混合混合混合冷却。冷却。冷却。冷却。第三步：培养第三步：培养第三步：培养第三步：培养稀稀稀稀 释释释释 度度度度过过过过 低低低低 ，菌菌菌菌 落落落落 密密密密集集集集 无无无无 法法法法计数计数计数计数可可可可以以以以计计计计数数数数，但但但但数数数数量量量量过过过过多多多多，费费费费时时时时费力费力费力费力数量合数量合数量合数量合适，统适，统适，统适，统计计算，计计算，计计算，计计算，作为结作为结作为结作为结果果果果数数数数量量量量太太太太少少少少，误误误误 差差差差 因因因因 素素素素太太太太 大大大大 ， 不不不不做计数做计数做计数做计数第二步：接种平板第二步：接种平板第二步：接种平板第二步：接种平板每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个每一个细菌会生成一个菌落菌落菌落菌落n n一一一一般般般般计计计计数数数数平平平平板板板板的的的的细细细细菌菌菌菌生生生生长长长长菌菌菌菌落落落落数数数数以以以以3030030300个个个个为为为为宜。宜。宜。宜。n n第四步第四步第四步第四步： 计数计数计数计数n细菌数量细菌数量=？n细菌数量细菌数量=数出的菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为125个个n细菌数量细菌数量=125/10-5=1.25107个个/mLn 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法平板计数法是采用最广的一种活菌计数法n如国标法水中如国标法水中细菌总数细菌总数的测定的测定 。n注注意意：作作空空白白及及取取平平行行样样（2 23 3组组）均均值值减减小小误差误差平均n n特点：特点：特点：特点：液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数n n又称又称又称又称MPNMPN法法法法 （或最可能数法）（或最可能数法）（或最可能数法）（或最可能数法）n nM Most ost P Probable robable N Numberumbern n例如例如例如例如测定测定测定测定SRBSRB（硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，厌氧厌氧厌氧厌氧）的数量）的数量）的数量）的数量n n提问：提问：提问：提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板法计数吗？为什么？n n一一一一般般般般不不不不能能能能，厌厌厌厌氧氧氧氧菌菌菌菌暴暴暴暴露露露露在在在在空空空空气气气气中中中中不不不不能能能能生生生生长长长长（除除除除非非非非厌厌厌厌氧氧氧氧培培培培养箱）养箱）养箱）养箱）n对这类菌可以利用它们生长时产生的对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征硫化亚铁黑色特征进进行行深层隔氧液体培养深层隔氧液体培养，按，按MPNMPN法进行计数。法进行计数。 3 3 2 010 -4 10-5 10-63 10- 10-2 10-3 10-4 10-5（1 1）稀释）稀释）稀释）稀释（2 2）稀释接种样品）稀释接种样品）稀释接种样品）稀释接种样品在液体表面加一层无菌在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气，液体石蜡隔绝氧气，恒温恒温37培养培养14天天记录变黑的试管情况记录变黑的试管情况（3 3）培养）培养）培养）培养1mlml+9mlml培培培培养养养养基基基基n n提问：提问：提问：提问：为什么有些试为什么有些试为什么有些试为什么有些试管变黑有些没有？管变黑有些没有？管变黑有些没有？管变黑有些没有？n n稀释程度、取样概率稀释程度、取样概率稀释程度、取样概率稀释程度、取样概率(4)统计查表计算统计查表计算n n根据根据根据根据不同稀释度变黑试管不同稀释度变黑试管不同稀释度变黑试管不同稀释度变黑试管n n统计出统计出数量指标数量指标n n三三三三位数及其中位数及其中位数及其中位数及其中最低稀释度最低稀释度最低稀释度最低稀释度n n（取（取（取（取变黑的管数最多变黑的管数最多变黑的管数最多变黑的管数最多、稀释度又最低稀释度又最低稀释度又最低稀释度又最低的的的的生长管生长管生长管生长管数数数数，为，为，为，为第一位第一位第一位第一位数字，数字，数字，数字，后面两个稀释度的后面两个稀释度的后面两个稀释度的后面两个稀释度的生长管生长管生长管生长管数数数数后两位数）后两位数）后两位数）后两位数）n n提问：提问：提问：提问：上例情况而言统计数量是几？上例情况而言统计数量是几？上例情况而言统计数量是几？上例情况而言统计数量是几？n n查表查表n n表表表表MPN表表表表320 10-4MPNMPN三管法测数统计表三管法测数统计表三管法测数统计表三管法测数统计表水中大肠菌群水中大肠菌群、铁细菌、硝化菌、亚硝化菌铁细菌、硝化菌、亚硝化菌也也用这种方法进行数量统计。用这种方法进行数量统计。 个菌个菌个菌个菌/ / / /毫升毫升毫升毫升n n细菌最可能数细菌最可能数通过其他精确的计数法，确定通过其他精确的计数法，确定的各种的各种数量指标数量指标时时细菌数量的最可能值细菌数量的最可能值上面例子中数量指标上面例子中数量指标上面例子中数量指标上面例子中数量指标“ “320320” ” 对应的细菌最可能数为个菌对应的细菌最可能数为个菌对应的细菌最可能数为个菌对应的细菌最可能数为个菌/ /毫升毫升毫升毫升，最低稀释度为最低稀释度为最低稀释度为最低稀释度为1010-4-4，折算出样品中菌浓度为折算出样品中菌浓度为折算出样品中菌浓度为折算出样品中菌浓度为 ？个菌个菌个菌个菌/ /毫升。毫升。毫升。毫升。n n薄膜薄膜薄膜薄膜微孔滤膜微孔滤膜微孔滤膜微孔滤膜（0.45um0.45um） （2 2）滤膜培养）滤膜培养）滤膜培养）滤膜培养膜有菌面冲上膜有菌面冲上膜有菌面冲上膜有菌面冲上n n原理原理原理原理膜抽滤膜抽滤膜抽滤膜抽滤（细菌浓（细菌浓（细菌浓（细菌浓缩）缩）缩）缩）+ + + + 膜平板培养膜平板培养膜平板培养膜平板培养 + + + + 计计计计数数数数（1 1）抽滤）抽滤）抽滤）抽滤（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）（滤器及膜事先灭菌）n n（3）统计计数）统计计数n n提提提提问问问问：假假假假如如如如 测测测测出出出出2 2 2 250505050个个个个菌菌菌菌落落落落，抽抽抽抽滤滤滤滤了了了了50505050mlmlmlml自自自自来来来来水水水水，自来水中菌浓度是多少呢？自来水中菌浓度是多少呢？自来水中菌浓度是多少呢？自来水中菌浓度是多少呢？ n n2505025050ml=5ml=5个个个个/ /mlml自来水自来水自来水自来水n n样品中的细菌数量样品中的细菌数量样品中的细菌数量样品中的细菌数量= =菌落数菌落数菌落数菌落数 抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数n n要求要求要求要求样品洁净样品洁净样品洁净样品洁净n n如空气或饮用水如空气或饮用水如空气或饮用水如空气或饮用水。 n？n n堵孔、菌太多难以分散堵孔、菌太多难以分散堵孔、菌太多难以分散堵孔、菌太多难以分散n n提问：提问：提问：提问：如何用活菌计数法测定较脏的水样？如何用活菌计数法测定较脏的水样？如何用活菌计数法测定较脏的水样？如何用活菌计数法测定较脏的水样？n n减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释减少滤液体积、无菌水稀释(三三)重量法重量法n n提问：已知什么条件提问：已知什么条件提问：已知什么条件提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？通过测定细菌群体重量知道其数量？通过测定细菌群体重量知道其数量？通过测定细菌群体重量知道其数量？n n已知已知已知已知单个细菌的平均重量单个细菌的平均重量单个细菌的平均重量单个细菌的平均重量 除法计算除法计算除法计算除法计算n n细菌的细菌的细菌的细菌的湿湿湿湿重量重量重量重量1010-15-151010-11-11g/g/个细胞个细胞个细胞个细胞n n干重约为干重约为干重约为干重约为湿重的湿重的湿重的湿重的10102020。n n1. 1. 干重法干重法干重法干重法n n方法：方法：含菌水样在含菌水样在含菌水样在含菌水样在105105110110下进行干燥恒重下进行干燥恒重下进行干燥恒重下进行干燥恒重（本质测本质测本质测本质测水中悬浮物重量水中悬浮物重量水中悬浮物重量水中悬浮物重量MLSSMLSS或或或或MLVSSMLVSS）。n n悬浮物无机物悬浮物无机物悬浮物无机物悬浮物无机物+ + + +有机物（包括细菌）有机物（包括细菌）有机物（包括细菌）有机物（包括细菌）n n提提提提问问问问：如如如如何何何何确确确确定定定定悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物中中中中有有有有机机机机物物物物与与与与无无无无机机机机物物物物的的的的量量量量？n n高温高温高温高温(550(550)灼烧灼烧灼烧灼烧n n无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解无机物化学性质稳定，高温下不会分解n n提提提提问问问问：什什什什么么么么情情情情况况况况下下下下可可可可以以以以直直直直接接接接用用用用悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物的的的的重重重重量量量量表表表表示细菌的重量？示细菌的重量？示细菌的重量？示细菌的重量？n n悬浮物中绝大多数是细菌。 （1）悬浮物中绝大多数为细菌时）悬浮物中绝大多数为细菌时n n细胞数目细胞数目细胞数目细胞数目= =MLSSMLSS个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量离心沉淀离心沉淀 滤膜过滤滤膜过滤计算计算105110下进行干燥下进行干燥恒重恒重恒重恒重称重称重或或或或MLSSMLSS悬浮物悬浮物悬浮物悬浮物（2）除细菌外还有大量无机悬浮物时）除细菌外还有大量无机悬浮物时n n WW无无无无n nMLMLV VSSSS挥发性悬浮物挥发性悬浮物挥发性悬浮物挥发性悬浮物MLSSMLSS WW无无 = =细菌群体的干重量细菌群体的干重量细菌群体的干重量细菌群体的干重量n n细胞数目细胞数目细胞数目细胞数目= = MLMLV VSSSS 个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量550下灼烧下灼烧2h称重称重105110下进下进行干燥恒重行干燥恒重称重称重MLSS（3）有大量）有大量非细菌有机悬浮物非细菌有机悬浮物时时n n提问：提问：如何测定呢？如何测定呢？n n不能用重量法，应改用其他方法。不能用重量法，应改用其他方法。不能用重量法，应改用其他方法。不能用重量法，应改用其他方法。n总总体体来来说说重重量量法法方方法法误误差差较较大大，一般只作为菌数粗略估算一般只作为菌数粗略估算n如如活活性性污污泥泥测测定定（以以重重量量MLSS、MLVSS间接表示细菌数量间接表示细菌数量）2.细胞含细胞含N量法量法n n大大大大多多多多数数数数生生生生物物物物包包包包括括括括细细细细菌菌菌菌，细细细细胞胞胞胞内内内内的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质氮氮氮氮含含含含量量量量比比比比较较较较稳稳稳稳定定定定，一一一一般般般般为为为为蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质干干干干重重重重15151616，平平平平均均均均为为为为1616。n n还还需需要要测测定定哪哪些些条条件件可可以以由由以以上上比比例例确确定定菌菌样样中中细细菌菌浓浓度度？ 如如何何试试验验操操作作及及计计算算呢？呢？ 3.DNA含量法含量法n n同种细菌的同种细菌的同种细菌的同种细菌的DNADNA含量一致含量一致含量一致含量一致, ,可通过测定可通过测定可通过测定可通过测定DNADNA的含量的含量的含量的含量来表示细菌的生长量来表示细菌的生长量来表示细菌的生长量来表示细菌的生长量n n少量纯细菌培养时少量纯细菌培养时少量纯细菌培养时少量纯细菌培养时细菌数量的测定细菌数量的测定细菌数量的测定细菌数量的测定。n n精确性非常高，精确性非常高，精确性非常高，精确性非常高，对对对对样品纯度以及仪器样品纯度以及仪器样品纯度以及仪器样品纯度以及仪器和人员的要求较高，和人员的要求较高，和人员的要求较高，和人员的要求较高，n总污染物总污染物影响促反应的方程表达式影响促反应的方程表达式影响促反应的方程表达式影响促反应的方程表达式n nv总污染物微生物利用速度；总污染物微生物利用速度；V（KXKX)最大速度；最大速度；X微生物浓度微生物浓度 Ks饱和常数饱和常数Ks劳伦斯方程劳伦斯方程忽略忽略KXKX (四四)其它生理生化其它生理生化指标指标法法提问提问：v指什么？指什么？COD降解降解vO2消耗消耗v产物产生产物产生v？求作试验！n n提提提提问问问问：当当当当你你你你需需需需要要要要测测测测定定定定某某某某水水水水样样样样中中中中细细细细菌菌菌菌数数数数量量量量时时时时，你你你你该该该该如何选择方法？如何选择方法？如何选择方法？如何选择方法？视要求、水样菌量、测试条件等等灵活选取视要求、水样菌量、测试条件等等灵活选取视要求、水样菌量、测试条件等等灵活选取视要求、水样菌量、测试条件等等灵活选取n n“生、老、病、死生、老、病、死”n n（根根根根据据据据投投投投食食食食方方方方式式式式）分分间间歇歇式式培培养养（分分分分批批批批培培培培养养养养）、连续式培养连续式培养两种情况两种情况n n提问：提问：提问：提问：如何人工进行细菌间歇培养？如何人工进行细菌间歇培养？如何人工进行细菌间歇培养？如何人工进行细菌间歇培养？n n只只只只有有有有开开开开始始始始时时时时的的的的一一一一次次次次性性性性投投投投料料料料和和和和接接接接种种种种细细细细菌菌菌菌（其其其其余余余余时时时时间间间间细菌根据环境变化自行生灭）细菌根据环境变化自行生灭）细菌根据环境变化自行生灭）细菌根据环境变化自行生灭）二、细菌的生长特性二、细菌的生长特性（“坐吃山空型坐吃山空型”）应用应用：生理特性研究、生物发酵和生物治污生理特性研究、生物发酵和生物治污生理特性研究、生物发酵和生物治污生理特性研究、生物发酵和生物治污（1）活细菌重量变化曲线）活细菌重量变化曲线曲线曲线：群体重量群体重量群体重量群体重量W(mgW(mg/ /l) l)时间时间时间时间t t 细菌细菌内源呼吸内源呼吸增长率增长率上上升升阶段阶段 及细菌大量及细菌大量死亡死亡阶段阶段 mg/L活活细细菌菌重重量量t0 时间时间曲线曲线tt点切线斜率值点切线斜率值= =? ? tt重量增长速率重量增长速率 t t 增长率增长率下下降降阶段阶段生长情况用活细菌生长曲线来描述生长情况用活细菌生长曲线来描述增长速率上升阶段增长速率上升阶段增长速率上升阶段增长速率上升阶段n n提问：提问：提问：提问：为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不断增大？断增大？断增大？断增大？n nA.A.营养物丰富营养物丰富营养物丰富营养物丰富，细菌增殖；，细菌增殖；，细菌增殖；，细菌增殖；B.B.细菌在细胞内以糖原、油细菌在细胞内以糖原、油细菌在细胞内以糖原、油细菌在细胞内以糖原、油滴等形式滴等形式滴等形式滴等形式储存营养物储存营养物储存营养物储存营养物，细菌，细菌，细菌，细菌个体重量增大个体重量增大个体重量增大个体重量增大增长率增长率 生生上升阶段上升阶段 mg/mL0 时间时间t活活细细胞胞重重量量 增长速率下降阶段增长速率下降阶段n n提问：提问：提问：提问：为什么增长速率为什么增长速率为什么增长速率为什么增长速率较前较前较前较前下降了？下降了？下降了？下降了？ 增长率增长率下下 降降阶段阶段 mg/mL0 时间时间t活活细细胞胞重重量量n n营养物浓度（好氧细菌还包括氧气）下降营养物浓度（好氧细菌还包括氧气）下降营养物浓度（好氧细菌还包括氧气）下降营养物浓度（好氧细菌还包括氧气）下降n n 这些限制性因素还不这些限制性因素还不这些限制性因素还不这些限制性因素还不是十分严重，细菌的代是十分严重，细菌的代是十分严重，细菌的代是十分严重，细菌的代谢速度变慢，没有停止谢速度变慢，没有停止谢速度变慢，没有停止谢速度变慢，没有停止n n代谢产物积累代谢产物积累代谢产物积累代谢产物积累对细菌的某些酶产生抑制对细菌的某些酶产生抑制对细菌的某些酶产生抑制对细菌的某些酶产生抑制 内源呼吸及死亡阶段内源呼吸及死亡阶段n n内源呼吸内源呼吸内源呼吸内源呼吸+ +毒物浓度更高毒物浓度更高毒物浓度更高毒物浓度更高n n （个体）（个体）（个体）（个体）瘦瘦瘦瘦死死死死n n （群体）（群体）（群体）（群体）死亡率大于出生率死亡率大于出生率死亡率大于出生率死亡率大于出生率n n从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。n n提问：提问：提问：提问：此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？n n不是，利用死亡细菌的残体营养不是，利用死亡细菌的残体营养不是，利用死亡细菌的残体营养不是，利用死亡细菌的残体营养(“(“化做红泥更护花或人吃人化做红泥更护花或人吃人化做红泥更护花或人吃人化做红泥更护花或人吃人”)”)n n各种生物具有类似的规律各种生物具有类似的规律各种生物具有类似的规律各种生物具有类似的规律n n实验室通常采用细菌的实验室通常采用细菌的实验室通常采用细菌的实验室通常采用细菌的数量变化绘制生长曲线数量变化绘制生长曲线数量变化绘制生长曲线数量变化绘制生长曲线，虽然两种曲，虽然两种曲，虽然两种曲，虽然两种曲线在本质上是相同的，但数量曲线也有它自身的特点和用途线在本质上是相同的，但数量曲线也有它自身的特点和用途线在本质上是相同的，但数量曲线也有它自身的特点和用途线在本质上是相同的，但数量曲线也有它自身的特点和用途。