狭叶荨麻中狭叶荨麻中多糖的提取研究多糖的提取研究姓姓 名：名： 指导老师：指导老师：专专 业：食品科学与业：食品科学与工程工程 研究意义研究意义 狭狭叶叶荨荨麻麻是是我我国国常常用用民民间间药药，始始载载于于图图经经本本草草，药药用用历历史史悠悠久久，已已被被收收入入1995年年卫卫生生部部药药品品标标准准（藏藏药药）第第一一册册。在在东东北北地地区区资资源源丰丰富富，却却尚尚未未被被开开发利用，具有广阔的市场前景。发利用，具有广阔的市场前景。 目目前前，我我国国对对狭狭叶叶荨荨麻麻的的基基础础研研究究甚甚少少，多多为为其其同同属属植植物物的的研研究究，因因此此我我们们选选取取狭狭叶叶荨荨麻麻作作为为研研究究对对象象，对对狭狭叶叶荨荨麻麻中中多多糖糖进进行行提提取取研研究究，为为对对其其进进行行深深入入研研究究奠奠定定基基础。因此，本论文的研究内容具有重要的意义。础。因此，本论文的研究内容具有重要的意义。国内外研究现状国内外研究现状 目目前前国国内内外外对对狭狭叶叶荨荨麻麻的的研研究究还还很很少少，主主要要在在于于它它的的提提取取物物的的药药理理作作用用的的研研究究。国国外外研研究究表表明明狭狭叶叶荨荨麻麻提提取取物物有有抗抗肾肾上上腺腺素素作作用用，而而国国内内也也有有报报道道狭狭叶叶荨荨麻麻水水煎煎液液具具有有明明显显的的抗抗凝凝血血作作用用。现现代代药药理理研研究究也也证证实实，荨荨麻麻多多糖糖有有显显著著的的抗抗炎炎、增增强强免免疫疫作作用用。因因此此，对对狭狭叶叶荨荨麻麻的活性成分的活性成分- -多糖的深入研究有待进一步开展。多糖的深入研究有待进一步开展。研究内容研究内容v 狭叶荨麻多糖的提取狭叶荨麻多糖的提取v 狭叶荨麻多糖的分离纯化狭叶荨麻多糖的分离纯化v 狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖光谱分析v 狭叶荨麻多糖组分分析狭叶荨麻多糖组分分析1. 狭叶荨麻多糖提取纯化工艺流程图狭叶荨麻多糖提取纯化工艺流程图 狭叶荨麻狭叶荨麻干品干品预处理预处理热水浸提热水浸提浓缩浓缩 醇沉醇沉离心离心狭叶荨麻狭叶荨麻粗多糖粗多糖Sevage法法脱蛋白脱蛋白有机溶剂有机溶剂萃取萃取干燥干燥狭叶荨麻狭叶荨麻多糖多糖狭叶荨麻多糖的提取狭叶荨麻多糖的提取 (1) 葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线 如如图图1所所示示，以以葡葡萄萄糖糖浓浓度度为为横横坐坐标标，吸吸光光度度为为纵纵坐坐标标得得标准曲线。回归方程为：标准曲线。回归方程为： C=12.188A-0.0005（R=0.9991） 通通过过回回归归方方程程以以及及提提取取率率的的计计算算公公式式计计算算狭狭叶叶荨荨麻麻在在最最优优试试验验条条件件下下的的多多糖糖提提取取率率为为6.309%。 图图1 葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线2. 狭叶荨麻多糖含量测定狭叶荨麻多糖含量测定 (2) 葡萄糖稳定性实验葡萄糖稳定性实验 如如图图2所所示示，以以时时间间为为横横坐坐标标，吸吸光光度度为为纵纵坐坐标标进进行行绘绘图图。结结果果表表明明所所用用测测定定方方法法显显色色后后5min内内稳稳定定，10min内内吸吸光光度度略略有有下下降降。因因此此应应该该在在显显色色后后5min内完成测定。内完成测定。图图2 葡萄糖标品稳定性图葡萄糖标品稳定性图2. 狭叶荨麻多糖含量测定狭叶荨麻多糖含量测定v 浸提温度浸提温度vv 浸提时间浸提时间vv 料液比料液比3. 狭叶荨麻多糖提取的影响因素狭叶荨麻多糖提取的影响因素(1) 浸提温度浸提温度 如图如图3所示，所示， 9090C C为最佳为最佳 提取温度提取温度。图图3 浸提温度对多糖提取率的影响浸提温度对多糖提取率的影响(2) 浸提时间浸提时间 如图如图4 4所示，所示， 1h为最佳提为最佳提 取时间。取时间。图图4 浸提时间对多糖提取率的影响浸提时间对多糖提取率的影响 (3) 料液比料液比 如图如图5所示，所示， 110为最佳为最佳 料液比。料液比。图图5 料液比对多糖提取率的影响料液比对多糖提取率的影响4. 正交试验正交试验 通过单因素试验得出正交试验因素水平表通过单因素试验得出正交试验因素水平表（如表（如表1），），选择选择L L9（34）正交表（表）正交表（表2）进行试验）进行试验。 因素因素水平水平 A AB BC C时间时间(min)料液比料液比温度温度() 0.51580 111090 1.5115100表表1 因素水平表因素水平表表表2 2 正交试验结果正交试验结果 方案方案 A BC提取率（提取率（% %）浸提时间浸提时间(min)料液比料液比温度（温度（） 1 10.50.5 1 15 580803.983.98 2 20.5 0.5 1 110 10 90 90 6.14 6.14 3 30.5 0.5 1 115 15 100 100 5.785.78 4 41 1 1 1151580805.67 5.67 5 51 1 1 15 5 90 90 6.23 6.23 6 61 1 1 110 10 100 100 6.19 6.19 7 71.5 1.5 1 11 10 0 80 80 5.26 5.26 8 81.51.51 115 15 90 90 5.34 5.34 9 9 1.5 1.5 1 15 5 100 100 4.97 4.97 K K1 10.5510.551 0.604 0.6040.527 0.527 K K2 20.6360.636 0.636 0.6360.701 0.701 K K3 30.592 0.592 0.599 0.5990.569 0.569 R R0.085 0.085 0.037 0.0370.174 0.174 表表3 3 正交正交试验方差分析表方差分析表因素因素偏差平方偏差平方和和自由度自由度F F比比F F临界界值显著性著性温度温度0.24022.7204.460* *时间0.06720.7594.460料液比料液比0.03120.3514.460误差差0.358 由正交试验结果（表由正交试验结果（表2）和方差分析表）和方差分析表(表表3)可知，可知， 最佳提取工艺条件为：最佳提取工艺条件为：料液比料液比1 1 1010，温度，温度9090，时，时间间1h1h。影响狭叶荨麻多糖提取率各因素的主次关系为：影响狭叶荨麻多糖提取率各因素的主次关系为：浸提温度浸提温度 浸提时间浸提时间 料液比料液比。 5. 优化方案验证试验优化方案验证试验表表4 优化工艺提取验证结果优化工艺提取验证结果 优选出最佳工艺后，进行验证试验，以确保优选出最佳工艺后，进行验证试验，以确保其重复性和准确性。其重复性和准确性。序号序号123RSD(%)多糖得率多糖得率(%)6.3276.2866.3151.10 由表由表4可知，验证的最佳工艺多糖得率稳定，可知，验证的最佳工艺多糖得率稳定，提取率高，证明优选出的最佳工艺合理可行。提取率高，证明优选出的最佳工艺合理可行。6. 醇沉比的选择醇沉比的选择 由图由图6可知，醇沉比可知，醇沉比为为13时狭叶荨麻多时狭叶荨麻多糖的提取率最高，所糖的提取率最高，所以醇沉比以醇沉比13为最佳为最佳条件。条件。图图6 6 醇沉比对多糖提取率的影响醇沉比对多糖提取率的影响 1. Sevage法脱蛋白法脱蛋白 在多糖溶液中按在多糖溶液中按5 51 1与与SevageSevage试剂（氯试剂（氯仿仿正丁醇正丁醇=5=51 1）混）混合，经充分振摇，将合，经充分振摇，将游离蛋白质沉淀，经游离蛋白质沉淀，经分液除去。分液除去。其脱蛋白其脱蛋白效果如图效果如图7 7所示。所示。 图图7 Sevage法脱蛋白效果图法脱蛋白效果图狭叶荨麻多糖的分离纯化狭叶荨麻多糖的分离纯化2.有机溶剂萃取有机溶剂萃取1) 石油醚萃取石油醚萃取 在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入石油醚，经加入石油醚，经充分振摇，充分振摇，将将杂杂质溶质溶于石油醚中于石油醚中，经分液，经分液除去。除去。其杂质除去效其杂质除去效果如图果如图8 8所示。所示。图图8 石油醚除石油醚除杂杂质效果图质效果图2) 乙醚萃取乙醚萃取 在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入乙醚，经充加入乙醚，经充分振摇，分振摇，将将杂杂质溶于质溶于乙醚乙醚之之中中，经分液除，经分液除去。去。其杂质除去效果其杂质除去效果如图如图9 9所示。所示。图图9 乙醚除乙醚除杂杂质效果图质效果图3) 乙酸乙酯萃取乙酸乙酯萃取 在多糖溶液中按在多糖溶液中按3 31 1加入乙酸乙酯，加入乙酸乙酯，经充分振摇，经充分振摇，将将杂杂质质溶于乙酸乙酯中溶于乙酸乙酯中，经，经分液除去。分液除去。其杂质除其杂质除去效果如图去效果如图1010所示。所示。图图10 乙酸乙酯除乙酸乙酯除杂杂质效果图质效果图红外光谱分析红外光谱分析 图图11中中3467cm-1处处有有吸吸收收峰峰，为为多多糖糖-O-H形形成成的的分分子子间间或或分分子子内内氢氢键键； 1430cm-1处处为为CO的的伸伸缩缩振振动动峰峰，为为多多糖糖的的特特征征吸吸收收峰峰；850cm-1处处表表明明组组成成的的单单糖糖有有-D-吡吡喃喃葡葡萄萄糖糖存存在在；760cm-1为为吡吡喃喃糖糖环环C-O-C对称振动对称振动峰峰。图图11 红外光谱图红外光谱图狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖光谱分析狭叶荨麻多糖组分分析狭叶荨麻多糖组分分析图图12 气相色谱分析图气相色谱分析图气相色谱分析气相色谱分析 由图由图12及表及表5可知，狭叶荨麻多糖主要由可知，狭叶荨麻多糖主要由3 3种单糖组成：种单糖组成：葡萄糖、木糖、葡萄糖、木糖、甘露甘露糖。并根据面积归一化法，面积之比近糖。并根据面积归一化法，面积之比近似等于物质量之比，可推算出各个单糖物质量之比大致为：似等于物质量之比，可推算出各个单糖物质量之比大致为：木糖木糖 葡萄糖葡萄糖 甘露糖甘露糖= =15.24 17.66 66. 10。峰号峰号保留保留时间组分名称分名称面面积归一化比例一化比例/%/%18.621木糖木糖14257.115.24218.209葡萄葡萄糖糖16561.917.66319.197甘露甘露糖糖62857.566.10表表5 5 狭叶荨麻多糖气相色谱数据表狭叶荨麻多糖气相色谱数据表结论结论 本论文通过对狭叶荨麻多糖提取本论文通过对狭叶荨麻多糖提取、分离、分离纯化的研究和多纯化的研究和多糖组成成分分析，主要得出以下结论：糖组成成分分析，主要得出以下结论：v对狭叶荨麻多糖进行提取条件优化的研究表明：料液比为对狭叶荨麻多糖进行提取条件优化的研究表明：料液比为 1 11010，浸提温度为，浸提温度为9090，浸提时间为，浸提时间为1h1h为最佳提取工艺条为最佳提取工艺条件。最佳醇沉比为件。最佳醇沉比为1 13 3。经优化试验验证，狭叶荨麻多糖在。经优化试验验证，狭叶荨麻多糖在优选工艺条件下提取率为优选工艺条件下提取率为6.36.30909% %。v本试验用本试验用SevagSevage e法脱蛋白，有机溶剂萃取对狭叶荨麻粗多糖法脱蛋白，有机溶剂萃取对狭叶荨麻粗多糖进行纯化进行纯化，结果显示效果比较理想。，结果显示效果比较理想。v对狭叶荨麻多糖样品进行红外光谱检测，图谱显示出一般多对狭叶荨麻多糖样品进行红外光谱检测，图谱显示出一般多糖类物质的特征吸收峰。糖类物质的特征吸收峰。v对狭叶荨麻多糖样品进行气相色谱分析，得出狭叶荨麻多糖对狭叶荨麻多糖样品进行气相色谱分析，得出狭叶荨麻多糖主要由主要由3 3种单糖组成：葡萄糖、木糖、种单糖组成：葡萄糖、木糖、甘露甘露糖。糖。