血清总胆红素及结血清总胆红素及结合胆红素测定合胆红素测定血清总胆红素及结合胆红素测定 重氮反应法测重氮反应法测定总胆红素和结合定总胆红素和结合胆红素胆红素血清总胆红素及结合胆红素测定【实验原理实验原理】血清中血清中结合胆合胆红素可直接与重氮素可直接与重氮试剂反反应，产生偶氮胆生偶氮胆红素；非素；非结合胆合胆红素素须有加速有加速剂咖啡因咖啡因-苯甲酸苯甲酸钠-醋酸醋酸钠作用，作用，其分子内其分子内氢键破坏后才能与重氮破坏后才能与重氮试剂反反应，也也产生偶氮胆生偶氮胆红素。本法重氮反素。本法重氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆使紫色偶氮胆红素素(吸收峰吸收峰530nm)转变成成蓝色偶氮胆色偶氮胆红素，素，在在600nm波波长比色，使比色，使检测灵敏度提高。灵敏度提高。血清总胆红素及结合胆红素测定【检验原理检验原理】总胆红素在总胆红素在pH3.0附近，在钒附近，在钒酸盐和表面活性剂存在下，可以被酸盐和表面活性剂存在下，可以被氧化成胆绿素。与此同时，胆红素氧化成胆绿素。与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。测定胆红特有的黄色也随之消失。测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中总胆红素的浓度。出样品中总胆红素的浓度。血清总胆红素及结合胆红素测定【试剂试剂】1咖啡因咖啡因-苯甲酸苯甲酸钠试剂2碱性酒石酸碱性酒石酸钠溶液溶液372.5mmol/L亚硝酸硝酸钠溶液溶液428.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液氨基苯磺酸溶液5重氮重氮试剂65.0g/L叠氮叠氮钠溶液。溶液。7胆胆红素素标准液准液血清总胆红素及结合胆红素测定【操作步骤操作步骤】1.样品的测定样品的测定 取取3支试管，按下表程序操作支试管，按下表程序操作.混匀后，波混匀后，波长600nm，对照管照管调零，零，读取取吸光度，在吸光度，在标准曲准曲线上上查出相出相应的胆的胆红素素浓度。度。血清总胆红素及结合胆红素测定2.标准曲线制作标准曲线制作 取5支试管，分别编号，然后按表稀释胆红素储存液配制胆红素标准液。血清总胆红素及结合胆红素测定混匀混匀(不可不可产生气泡生气泡)，按，按总胆胆红素素测定法操作。每一定法操作。每一浓度作度作3个平行管，并个平行管，并分分别做做标准准对照管，用各自的照管，用各自的标准准对照照管管调零，零，读取取标准管的吸光度。配制准管的吸光度。配制标准液用的溶准液用的溶剂血清中尚有少量胆血清中尚有少量胆红素，素，同同样测定后得一吸光度定后得一吸光度值。每个。每个标准管准管的吸光度的吸光度值均均应减去此吸光度，然后与减去此吸光度，然后与相相应胆胆红素素浓度度绘制制标准曲准曲线血清总胆红素及结合胆红素测定【参考范围参考范围】血清血清总胆胆红素：素：5.119mol/L(0.31.1mg/dl)；血清血清结合胆合胆红素：素：1.76.8mol/L(0.10.4mg/dl)。【临床意义临床意义】1血清血清总胆胆红素素测定的意定的意义(1) 有无黄疸及黄疸程度的有无黄疸及黄疸程度的鉴别。(2) 肝肝细胞胞损害程度和害程度和预后的判断后的判断胆胆红素素浓度明度明显升高反升高反映有映有严重的肝重的肝细胞胞损害。但某些疾病如胆汁淤害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎型肝炎时，尽管肝尽管肝细胞受累胞受累较轻，血清胆，血清胆红素却可升高。素却可升高。(3) 新生儿溶血症新生儿溶血症血清胆血清胆红素有助于了解疾病素有助于了解疾病严重程度。重程度。(4) 再生障碍性再生障碍性贫血及数种血及数种继发性性贫血血(主要主要见于癌或慢性于癌或慢性肾炎引起炎引起)，血清，血清总胆胆红素减少。素减少。血清总胆红素及结合胆红素测定2血清血清结合胆合胆红素素测定的意定的意义结合胆合胆红素与素与总胆胆红素的比素的比值可用于可用于鉴别黄疸黄疸类型。型。(1) 比比值20% 溶血性黄疸，溶血性黄疸，阵发性血性血红蛋白尿，蛋白尿，恶性性贫血，血，红细胞增多症等。胞增多症等。(2) 比比值40%60% 肝肝细胞性黄疸。胞性黄疸。(3) 比比值60% 阻塞性黄疸。阻塞性黄疸。但以上几但以上几类黄疸，尤其是黄疸，尤其是(2)、(3)类之之间有重叠。有重叠。【临床意义临床意义】血清总胆红素及结合胆红素测定谁是动名词？谁是动名词？doing胆红素氧化酶法测胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆定总胆红素和结合胆红素红素血清总胆红素及结合胆红素测定 【原理原理】 胆红素呈黄色，在胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。胆红素附近有最大吸收峰。胆红素氧化酶氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。在在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。其氧化。在在pH3.74.5缓冲液中，缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红催化单葡萄糖醛酸胆红素素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分及大部分胆红胆红素氧化，非结合胆红素素氧化，非结合胆红素(Bu)在此在此pH条件下不被氧化。条件下不被氧化。用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下作标准品，检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。血清总胆红素及结合胆红素测定【试剂】10.1mol/LTris-HCl缓冲液冲液(pH8.2) 称取三称取三羟甲基氨基甲甲基氨基甲烷(Tris)1.211g，胆酸，胆酸钠172.3mg,十二十二烷基硫酸基硫酸钠(SDS)432.6mg，溶于，溶于去离子水去离子水90ml中，在室温中，在室温(2530)用用1mol/L盐酸酸调节pH至至8.2(约用用6ml)，再加蒸，再加蒸馏水至水至100ml，置冰箱保存，此液含，置冰箱保存，此液含4mmol/L胆酸胆酸钠、15mmol/L SDS。20.2mol/L磷酸磷酸盐缓冲液冲液(pH4.5)。3BOD溶液溶液如系如系冻干品，按干品，按说明明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜宜过长(约可保存可保存1周周)，如系液体，如系液体(可能含有甘油可能含有甘油)，置，置4冰箱可保存冰箱可保存较长时间，BOD贮存溶液的存溶液的酶活性一般在数千至活性一般在数千至1万万2万万U/L，BOD工工作液作液酶活性可按反活性可按反应液中液中BOD终浓度达度达0.31.0U/ml计算。算。4总胆胆红素素标准液准液(342mol/L) 按胆按胆红素素测定定J-G法中方法配制，或市法中方法配制，或市售合乎要求的售合乎要求的标准液。准液。5结合胆合胆红素素标准液准液将将DTB配于胆配于胆红素素浓度可忽略不度可忽略不计的人血清中，的人血清中，或用或用冻干品按干品按说明明书要求重建。配制后分装于聚丙要求重建。配制后分装于聚丙烯管内，管内，70保保存，可存，可稳定定6个月。个月。冻干品未重建前置低温中，至少干品未重建前置低温中，至少稳定定1年。年。血清总胆红素及结合胆红素测定【操作步骤操作步骤】 总胆红素和结合胆红素测定分别按表标准管进行。取总胆红素和结合胆红素测定分别按表标准管进行。取4 4支试支试管，标明标准空白管，测定空白管，标准管和测定管。管，标明标准空白管，测定空白管，标准管和测定管。 血清总胆红素及结合胆红素测定加入加入BOD工作液后立即混匀，置工作液后立即混匀，置37C水浴水浴5min，用分光光度计，在，用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零，波长，去离子水调零，读取各管吸光度读取各管吸光度(A)。用于对照管的比色杯与非。用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。对照管的比色杯不得混用。血清总胆红素及结合胆红素测定谢谢谢谢血清总胆红素及结合胆红素测定此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！17血清总胆红素及结合胆红素测定