检测中心培训（一）080114液相色谱串联三重四级杆质谱基础知识一 液质联用n为什么要液质联用？n有很多物质如硝基呋喃类、氨基糖苷类在常规的检测器如紫外、荧光检测器上没有响应的n液质联用的实质n质谱仪作为液相色谱的检测器一 液质联用n液质联用仪n兽药残留中应用最广泛的一种液质联用仪-液相色谱串联三重四级杆质谱液相色谱质谱数据处理系统一 液质联用n液质联用仪的组成真空系统真空系统样品入样品入口口检测器检测器数据系数据系统统质量分析质量分析器器离子化离子化（离子源）（离子源）大气大气 液相色液相色谱谱质谱部分一 液质联用n离子源n最常用的离子源-电喷雾离子源（ESI)喷雾针装置喷雾针装置喷雾室喷雾室毛细毛细管管四极预四极预杆杆干燥干燥气气一 液质联用n质量分离器n兽药残留最常用的是三重串联四级杆（QqQ）Q1q2Q3一 液质联用n整个质谱仪的模式图Q1q2Q1电喷雾离子源电喷雾离子源检测器检测器二 质谱基本原理n质谱：称量离子质量的工具12 units0 m/e二 质谱基本原理n质谱：称量离子质量的工具12 units12 m/e二 质谱基本原理n质谱：称量离子质量的工具8 9 10 11 12 13 14 15 1612 units12 m/e二 质谱基本原理n质谱：称量离子质量的工具8 9 10 11 12 13 14 15 1612 units14 m/e二 质谱基本原理n质谱：称量离子质量的工具12 m/e8 9 10 11 12 13 14 15 16质荷比质荷比分子的数量分子的数量三 质谱基本概念n质谱分析法：主要是通过对样品离子质荷比的分析而实现对样品进行定性和定量的一种方法n质荷比：指带电粒子的质量与所带电荷之比值。以m/e表示。是质谱分析中的一个重要参数，不同m/e值的粒子在一定电磁场下，所运行的轨迹是不同的。三 质谱基本概念n只有一定质荷比的离子才能通过质量分离器而被检测器所感应质量分析器质量分析器离子源离子源mmabovembelow检测器检测器离子源X+,X-RF/DCRF/DC三 质谱基本概念n质谱图n样品的分子在离子源内电离，产生各种质荷比（m/e）的离子，然后通过质量分析器按其质荷比分离，分离后的离子依次被检测器检测并记录下来，形成一个按质荷比大小排列的图谱。三 质谱基本概念n质谱图n总离子流图（TIC）：计算机可以把采集到的每个质谱的所有离子相加得到总离子强度,总离子强度随时间变化的曲线就是总离子色谱图三 质谱基本概念n总离子流图（TIC）总离子流图的横座标是出峰时间,纵座标是峰高。总离子色谱图与一般色谱仪得到的色谱图基本上是一样的。三 质谱基本概念n质谱图n选择离子流图（SIM)：选取其中几个特征离子扫描，对保留时间作图，即得到选择离子色谱图。三 质谱基本概念n选择离子流图（SIM)：SIM通过去除本底和其他无关离子的干扰，降低噪声，提高选择性、分辨率和灵敏度，可使复杂的TIC简化，对特定化合物的分析或化合物的分类十分有用。三 质谱基本概念n质谱图：n棒状图：n对于电喷雾串联三重四级杆质谱，Q1中离子还是完整的（母离子），分子在q2中与Ar碰撞，产生子离子，子离子在Q3中分离，并为计算机所记录，可得到棒状图三 质谱基本概念n棒状图：横坐标是质荷比(m/z)、纵坐标是离子的相对强度，以基峰为100%、经过计算机处理的质谱棒状谱图称为棒图。三 质谱基本概念n棒状图：n分子离子峰：进入质谱离子源的物质在电离过程中失去一个电子而形成的单电荷离子，它代表该物质的分子量分子离子峰碎片离子峰三 质谱基本概念n棒状图：n基峰：丰度最高的那个峰n离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度.分子离子峰碎片离子峰基峰四 质谱进行定性分析n质谱怎么确证物质的？n色谱的保留时间n母离子的质荷比n子离子的特征四 质谱进行定性分析n欧盟2002/657/EC指令中规定在农药和兽药残留分析中以质谱作为确认方法，必须达到4点的要求，才能满足鉴定nLC/MS/MS，一个母离子为1点，一个子离子为1.5点，那么确认时只需选择1个母离子和2个子离子即可达到4点的要求二级质谱很容易到达此要求四 质谱进行定量分析n质谱的定量计算n用LC-MS/MS进行定量分析，其基本方法与普通液相色谱法相同。n即通过色谱峰面积和标样进行定量。五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nFull Scan（全扫描）五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nFull Scan（全扫描）残留分析的样品基质较为复杂，用全扫描的话，得到的图可能一个特征的峰都没有五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nSIM（选择离子监控）五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nSIM（选择离子监控）与全扫描相比，基质的影响大大降低，得到一个m/z特定的峰。但这就能定性了吗？五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nMRM（多级反应监测）五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nMRM（多级反应监测）在药残分析中，常用的扫描方式是多反应监测五 质谱是如何得到如此丰富的图谱的？（质谱的扫描方式）n质谱的扫描方式nMRM（多级反应监测）n多组分同时分析n共流出物的分析n母离子-子离子关系明确，定性能力强n复杂样品、脏样品的分析n同位素内标的使用六 质谱图的解释n质谱图的解释n质谱最难的是图谱的解析n参考书有，王光辉著有机质谱解析n经验n我们所做的已知化合物，并且有现成的方法和图谱