需氧芽孢杆菌需氧芽孢杆菌 1需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种与医学有关5个种炭疽芽胞杆菌（B.anthracis）蜡样芽胞杆菌（B.cereus）蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）巨大芽胞杆菌（B.megaterium）苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）2 第一节第一节 炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis，B.anthraci )一、临床意义一、临床意义炭疽是人畜共患的急性传染病主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎3致病物质n n荚膜：n n抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散n n炭疽毒素：n n保护性抗原、致死因子、水肿因子4所致疾病 n n炭疽病炭疽病：n n传染源：患病食草动物及其制品或被污染物n n传播途径：接触皮肤炭疽 食用肠炭疽 吸入肺炭疽n n可并发败血症，死亡率极高5乙类传染病乙类传染病发生肺炭疽按甲类处理发生肺炭疽按甲类处理病后可获得持久免疫力病后可获得持久免疫力6n n形态染色:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜二、二、 微生物特性微生物特性 炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000 革兰染色 10007n n芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央n n多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞n n在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖8培养特性：需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温 度3035普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、 无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边 缘呈卷发状9n nBAP：1215h不溶血，1824h轻微溶血n n其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落 10n n肉汤絮状沉淀生长n n明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。n nNaHCO3BAP：-有毒株5%CO2、372448h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) -无毒株粗糙型菌落11生化反应：生化反应：n n分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，n n有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气n n水解淀粉、还原硝酸盐n n不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不分解尿素n n在牛乳中生长24天牛乳凝固缓慢胨化n n触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）12 抗原构造：n n菌体多糖抗原： -与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（能与特异性抗体发生环状沉淀反应（AscoliAscoli热热沉淀反应）。沉淀反应）。 -特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、1414型型肺炎链球菌、人肺炎链球菌、人A A血型抗原发生交叉反应。血型抗原发生交叉反应。13荚膜多肽抗原： -与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细 菌生长和扩散 -荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义芽胞抗原： 有免疫原性和血清学诊断价值14n n炭疽毒素：-保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分-单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性-具有抗吞噬和免疫原性15抵抗力：抵抗力：-芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140 3h才能杀灭-在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年-生物武器16-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化 剂较敏感，常用以下方法杀菌： 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感17n n要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策三、微生物学检验三、微生物学检验18标本的采集与处理标本的采集与处理n n皮肤炭疽：病灶深部标本n n肺炭疽：痰和血液n n肠炭疽：粪、呕吐物n n脑膜炭疽：CSF、血液n n死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。19无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振 荡1015min 、静置10min，取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤 剂振荡1015min ，离心取沉淀物增菌和分离培养 20生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验21痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌374h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色 G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告22n n涂片染色：-G染色、荚膜染色、芽胞染色初步报告-荚膜荧光抗体染色n n核酸检测：核酸杂交n n分离培养：-BAP、戊烷脒多粘菌素B平板-2%兔血清肉汤增菌分离培养23鉴定试验：n n形态和菌落特征n n生化试验:表表11-111-1n n串珠试验:-接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤 中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体-与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关-类炭疽无此现象24青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片25 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验： 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板， 10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接种26植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断27第二节第二节 蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus, B. cereus )28一、临床意义食物中毒含菌量达含菌量达10105 5/g/g以上以上呕吐型呕吐型耐热肠毒素耐热肠毒素腹泻型腹泻型不耐热肠毒素不耐热肠毒素全眼球炎（外伤后）心内膜炎、败血症和脑膜炎29n n夏、秋季多见n n食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食n n在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见n n中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意30n n形态与染色：- G- G+ +大杆菌大杆菌- -生长生长6h6h后即形成圆形芽胞、位于后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体菌体中心或次末端、不突出菌体- -菌体两端平截，多数呈链状排列菌体两端平截，多数呈链状排列- -引起食物中毒的菌株多有周鞭引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜毛、无荚膜二、微生物特性二、微生物特性31培养特性：培养特性：需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度3035普通琼脂平板：菌落较大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽32n nBAP 有溶血卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应33生化反应：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精，产酸不产气能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂 酶（+） 多次传代后生化特性常可改变 34抵抗力：耐热，肉汤中细菌需10020min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药35三、微生物学检验n n标本采集： 可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。36确诊由该菌引起的食物中毒必须确诊由该菌引起的食物中毒必须：n n从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险n n从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型37检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种 普通琼脂平板、BAP 、卵黄平板3718-24h纯培养动物试验（肠毒素测定）生化反应血清凝集（分型）报告结果直接涂片染色镜检38检验方法：直接镜检分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测39