色谱条件的选择讲稿山东大学王吉顺2019.8:色谱条件包括以下内容：1.仪器：消费商，型号2.色谱柱：柱商品称号，填料商品称号，填料类型，色谱柱长度cm和内径mm，填料粒经um3.流动相：流动相组成和比例，流速ml/min4.检测器：型号及参数如波长nm5.进样量：体积ul6.柱温：其中我们更为关怀的是：色谱柱和流动相本章节主要讨论的问题:色谱柱的选择大多数化合物是可以运用C18柱分别C18优点：柱廉价，流动相廉价，运用时间长，易于经过改动流动相得到最正确分别，药品本身具有纯度高的特点，容易分别，辅料和分解产物是分别的难点。比中药成分的分别，体液中药物成分的分别，微量成分的分别，杂质成分的分别，食品中药物残留的分别简单的多。:选择色谱条件的方法 1查文献，学习他人的方法2文献中没有的新药和新化合物可以运用构造类似化合物的色谱条件3本人积累药物分析的色谱条件，从中寻觅规律，尤其是要总结处理问题的方法。把本人积累的方法用于以后的色谱分析中。不建议在本人对被分别物质的性质不了解的情况下，本人探求色谱条件:色谱柱的分类 1根据担体资料分类1硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基2聚合物型：聚苯乙烯类离子交换；凝胶色谱柱；聚丙烯酸酯离子交换；聚乙烯醇：C18；离子交换3钛柱：比硅胶型的稳定性提高4其它类型:色谱柱的分类2.根据分别方式分类(1)正相：SiO2；CN；NH2；苯基(2)反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基(3)离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换强碱阴离子交换；强酸阳离子交换(4)凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤(5)其它类型：手性柱等:色谱柱的分类3.根据色谱柱尺寸分类 110cm50cm内径为制备柱 24cm8cm内径为规范柱 33cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱 4柱长普通为15cm、25cm、30cm；50cm普通用于制备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和维护柱) :色谱柱选择方法 1.氨基酸 (1)构造特殊，普通运用离子交换柱分别，阳离子交换柱是运用最广泛,是最成熟的方法。分别氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱，锂型柱可以分别谷氨酰胺和谷氨酸。 (2)反相柱也可以分别氨基酸，但不能分别一切氨基酸。柱前衍生化法分别水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。 :氨基酸分析分析条件：色谱柱：Shim-pakISC-07/S1504Li15cm4.0mmLi型磺酸基，氨基酸分析公用柱流动相：柠檬酸缓冲溶液，梯度洗脱流速：0.3ml/min柱温：55检测器：荧光Ex.238nm,Em450nm方法：OPA柱后衍生化法:色谱柱选择方法肽和蛋白质凝胶过滤：根据分子量的大小差别进展分别离子交换：根据分子所带的电荷的差别进展分别反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进展分别亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进展分别:蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol30050cm7.9mm二醇基水溶性凝胶柱，蛋白质分析公用柱流动相：10mM磷酸缓冲液pH7和0.1MNaCl流速：1.0ml/min柱温：室温检测器：紫外280nm色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶2.乳酸脱氢酶3.烯醇酶4.腺苷酸激酶5.细胞色素C:蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol30050cm7.9mm消除残留硅醇基C2柱，300A多孔硅胶流动相：硫酸铵/磷酸缓冲液pH7梯度洗脱流速：0.5ml/min柱温：室温检测器：紫外220nm色谱峰：1.细胞色素C2.肌红蛋白3.核糖核酸酶A4.铁传送蛋白5.糜蛋白酶原A:色谱柱选择方法核酸核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要位置。核酸可以分为一下三类：腺嘌呤核酸碱基腺苷核苷；核酸碱基糖腺苷酸核苷酸；核苷磷酸腺嘌呤核酸碱基和腺苷核苷；核酸碱基糖用阳离子交换柱或反相柱进展分别；腺苷酸核苷酸；核苷磷酸用阴离子交换柱分别，选择适宜的流动相也可以用反相柱进展洗脱；:核酸分析条件：色谱柱：Shim-pakWAX15cm4.0mm叔氨基阴离子交换柱，用于分析核苷酸流动相：20mM磷酸缓冲液pH7480mM磷酸缓冲液pH6.8梯度洗脱流速：1.0ml/min柱温：45检测器：紫外260nm色谱峰：1.尿苷酸2.胞苷酸3.腺苷酸4.鸟苷酸5.尿苷二磷酸6.胞苷二磷酸7.腺苷二磷酸8.尿苷三磷酸9.鸟苷二磷酸10.胞苷三磷酸11.腺苷三磷酸12.鸟苷三磷酸:核酸分析条件：色谱柱：Shim-pakSBCC815cm2.5mm小孔径硅胶键合C8流动相：20mM磷酸二氢钾缓冲液/甲醇93/7流速：0.5ml/min柱温：室温检测器：紫外260nm色谱峰：1.胞苷2.尿苷3.鸟苷4.胸苷5.腺苷:核酸分析条件：色谱柱：ODS柱15cm6.0mm经甲烷基化处置的ODS柱流动相：100mM磷酸缓冲液和200mM高氯酸钠溶液梯度洗脱流速：1.5ml/min柱温：50检测器：紫外260nm色谱峰：1.未知峰2.胞嘧啶3.尿嘧啶4.鸟嘌呤5.腺嘌呤6.胞苷7.尿苷8.胸腺激素9.腺苷10.鸟苷11.胸苷:色谱柱选择方法糖的分别糖的种类很多，可分为单糖木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳糖、二糖蔗糖，麦芽糖、低聚糖和多糖。单糖和二糖可以运用氨基柱分别分别异构体效果不很好，还可以运用阴离子交换柱分别，缺陷是分别时间较长。低聚糖也可以运用氨基柱分别分别异构体效果不很好，还可以运用水溶性凝胶过滤色谱柱进展分别色谱柱价钱较贵，色谱柱不易保管。多糖运用水溶性凝胶过滤色谱柱进展分别。另外还用部分公司消费糖分析公用色谱柱。:糖的分别分析条件：色谱柱：NH2柱15cm6.0mm硅胶键合NH2柱流动相：乙腈/水7/3流速：1.0ml/min柱温：室温检测器：示差折光色谱峰：1.丙三醇2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.麦芽糖7.乳糖:糖的分别分析条件：色谱柱：磺化聚苯乙烯Ca型柱30cm7.9mm分别机理为凝胶浸透配位交换流动相：乙腈/水7/3流速：1.0ml/min柱温：室温检测器：示差折光色谱峰：1.丙三醇2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.麦芽糖7.乳糖:色谱柱选择方法维生素的分别维生素分为水溶性维生素和脂溶性维生素水溶性维生素：维生素B，维生素C，维生素H，维生素P，泛酸等脂溶性维生素：维生素A，维生素D，维生素E，维生素K分别方式：和脂溶性维生素均可运用反相洗脱法分别。一些脂溶性维生素可以运用分配色谱法分别:维生素C的分别分析条件：色谱柱：NH2柱15cm6.0mm硅胶键合NH2柱，分配色谱流动相：乙腈/10mM磷酸缓冲液pH2.63/1流速：1.5ml/min柱温：40检测器：紫外245nm色谱峰：1.异抗坏血酸2.抗坏血酸:维生素E的分别分析条件：色谱柱：SiO2柱5cm4.6mm硅胶键合NH2柱，分配色谱流动相：正己烷/二恶烷/乙醇98/2/0.2流速：2.5ml/min柱温：室温检测器：紫外295nm色谱峰：:维生素E的分别分析条件：色谱柱：NH2柱15cm6.0mm硅胶键合NH2柱，分配色谱流动相：正己烷/异丙醇25/1流速：1.5ml/min柱温：40检测器：紫外297nm色谱峰：:维生素B族的分别分析条件：色谱柱：ODS柱15cm6.0mm硅胶键合NH2柱，分配色谱流动相：【100mM硫酸钠pH2.1和1.2mM辛烷磺酸钠】/乙腈9/1流速：1.2ml/min柱温：40检测器：紫外210nm色谱峰：1.烟酸2.烟酰胺3.泛酸4.磷酸核黄素5.吡哆素6.咖啡因7.硫胺素8.核黄素:色谱柱选择方法阴阳离子分别阴离子可以运用离子交换柱分别，也可以运用C18分别离子对色谱法。:离子交换法分别二价阳离子分析条件：色谱柱：磺化聚苯乙烯磺酸基离子交换柱15cm5.0mm离子交换色谱流动相：0.3M乳酸水溶液流速：1.0ml/min柱温：40检测器：电导色谱峰：:离子对色谱法分别阴离子分析条件：色谱柱：ODS柱15cm6.0mm硅胶键合NH2柱，分配色谱流动相：0.8mM苯三酸和10mM四丁基氢氧化铵pH4.6流速：1.5ml/min柱温：40检测器：紫外282nm色谱峰：:色谱柱选择方法非极性化合物和弱极性化合物普通运用ODS均可分别。被测样品在流动相中微溶，假设溶解度大那么出峰较快，不溶那么不出峰。芳烃普通作为ODS柱的柱效测试样品，以甲醇水作流动相便可得到对称峰型，否那么色谱柱有问题。假设非极性化合物和弱极性化合物在ODS上拖尾，四氢呋喃是很好的减尾剂。带有氨基的有机化合物是检验ODS柱能否封端的指示剂如尿嘧啶。:色谱柱柱效测定方法分析条件：色谱柱：ODS柱15cm6.0mm流动相：甲醇/水3/1流速：1.0ml/min柱温：40检测器：紫外254nm色谱峰：1.尿嘧啶2.苯3.萘4.联苯:色谱柱选择方法总结1查文献，学习他人的方法2文献中没有的新药和新化合物可以运用构造类似化合物的色谱条件3本人积累药物分析的色谱条件，从中寻觅规律，尤其是要总结处理问题的方法。把本人积累的方法用于以后的色谱分析中。不建议在本人对被分别物质的性质不了解的情况下，本人探求色谱条件: