Identification and Collection of Algae胡韧胡韧暨南大学水生生物研究中心暨南大学水生生物研究中心藻类的采集和鉴定Sample CollectionMonitoring Site Selection1Monitoring Time Selection2Required Equipment3Collection methods4hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Monitoring Site Selection 11Segments that have very different water quality or pollution potential in specific areas should have more than one station.2Select monitoring sites that best represent water quality conditions of a water body.3Sites may be located below major pollution sources.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Monitoring Site Selection 24Lakes and estuaries should have stations in the major arms and near the dam (reservoirs).5For routine monitoring in freshwater streams and rivers, sites must have either a stream flow gage or be suitable for conducting flow measurement. 6As a general rule, streams between 25 and 50 miles long require two stations.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Monitoring Time Selection1-4 times/monthSampling frequencyAccording to different programSummerseasonalSpringSummerhydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Monitoring Time SelectionFlowFlowvBaseline monitoring includes samples collected over a range of flow conditions. FlowFlowvWhen samples are collected during abnormally high or low flow, the abnormal conditions will be recorded in the field logbook and on the observation lines of the sample data form. hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Monitoring Time SelectionRainRainLast rainfall information is very useful in interpreting historical data.TidalTidalTidal considerationsDailyDailyThe same time in different days (eg. 8:00-10:00 am)hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Required Equipmentv浮游生物采集网浮游生物采集网 25号（号（64 m ） 13号（号（86 m ）v采水器采水器 2.5 L 5 Lhydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定定量采样方法：用采水器取水面以下0. 5m 至离湖底0. 5m 的混合水样10L 。定性样品用孔径为6m 或10m的浮游生物网过滤获得。Required Equipmenthydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定边长1M45 cm9 cm63 cm自制浮游植物网自制浮游植物网hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定不同水体定量样品的采集不同水体定量样品的采集v对于一般富营养化调查，取水面以下对于一般富营养化调查，取水面以下0.5米处的水米处的水样即可。样即可。v对于多样性调查，则要取对于多样性调查，则要取生物多样性生物多样性更更高高的地方，的地方，所以多采取混合水样。所以多采取混合水样。v没有分层的浅水湖泊，每没有分层的浅水湖泊，每1米一个样取至水底上方米一个样取至水底上方0.5米处。米处。v有分层的水体，应取至透明度的有分层的水体，应取至透明度的1.5倍且包括斜温倍且包括斜温层的深度。层的深度。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定其它定量采样工具其它定量采样工具lintergrated hose-pipe sampler - 5 m length of 2.5 cm diameter plastic piping with a weighted collar at one endla cord attache to the hose and boatla rubber cork to fit one end of the hosehydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定其它采样用品其它采样用品v透明度盘透明度盘v浊度计浊度计vpH计计v多参数水质仪多参数水质仪hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定透明度测定透明度测定Procedurev Lower disk into the water on the shaded side of the boat while keeping a firm grip on the line.v As the disk is lowered, count the number of depth marks on the line.v Keep lowering the disk until it is no longer visible; record the depth according the line marks.v Slowly raise the disk, and when it appears again, record the depth.v The average of these two depths is the Secchi depth.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Field Data LogbooksvStation IDv Sampling Datev Locationv Sampling Depth (if other than surface)v Sampling Timev Sample Collectors Initials (if several persons in the region collect this data)v Record of all measured field parameters and their respective values.For each visit to an individual station where field and/or samples are collected record the following:hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Field physicochemical parameters include part or all of the following:v Dissolved Oxygenv Chlorine Residualv Temperaturev Salinity (tidal waters only)v pHv Secchi Disk Transparencyv Specific Conductancev Days Since Last Precipitation Event (significant enough to influence water quality).v Flow Severityhydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Field Data Logbookshydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Other ObservationsvWater Appearance Color, unusual amount of suspended matter, debris or foam, etc.vWeather Recent meteorological events that may have impacted water quality; heavy rains, cold front, very dry, very wet, etc.vBiological Activity Excessive macrophyte, phytoplankton or periphyton growth, The observation of water color and excessive algal growth is very important in explaining high chlorophyll a values. Other observations such as fish, birds and spawning fish are noted.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Other ObservationsvUnusual Odors Hydrogen sulfide odor, musty odor, sewage odor, etc.vWatershed or Instream Activities Instream or drainage basin activities or events that are impacting water quality; bridge construction, shoreline mowing, livestock watering upstream, etc.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Other ObservationsvRecord of Pertinent Observations Related to Water Quality and Stream Uses.vIf the water quality conditions are exceptionally poor, note that standards are not met in the observations, for example, dissolved oxygen is below minimum criteria.vUses-swimming, wading, boating, fishing, irrigation pumps, navigation, etc.vEventually, for setting water quality standards, the level of use will be based on comments related to the level of fishing and swimming activities observed at a station.hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Sample Fixation固定液的配方如下：固定液的配方如下：v 定性样品固定液定性样品固定液 甲醛：丙三醇：水甲醛：丙三醇：水=10：10：80（体积（体积比），可再加比），可再加1ml冰醋酸，可以防止易收缩的藻类变形。冰醋酸，可以防止易收缩的藻类变形。v 定量样品固定液（鲁哥试液）定量样品固定液（鲁哥试液） 20g碘化钾溶解于含有碘化钾溶解于含有20ml冰醋酸的冰醋酸的200ml的水中，再加的水中，再加10g碘溶解其中，用棕色碘溶解其中，用棕色瓶保存。改良的可加瓶保存。改良的可加4ml丙三醇丙三醇，可用于对浮游动物的保，可用于对浮游动物的保存。存。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定从10L混合水样中取1L作为 定量样品，用Lugols 碘液固定并沉淀浓缩至50mL ，作定量计数用。将部分样品经酸处理，用于在油镜下对硅藻进行鉴定。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Sedimentation and Concentrationv沉淀和浓缩在筒形分液漏斗中进行。把分液漏斗固定在架子中，沉淀和浓缩在筒形分液漏斗中进行。把分液漏斗固定在架子中，放在稳定的桌子上。将水样倒入分液漏斗，使浮游植物自然沉淀。放在稳定的桌子上。将水样倒入分液漏斗，使浮游植物自然沉淀。v理论上，浮游植物最小颗粒沉降速率为理论上，浮游植物最小颗粒沉降速率为0.3cm/h, 若分液漏斗中水若分液漏斗中水柱高度为柱高度为20cm，则需沉淀，则需沉淀60h。实际上，藻类大小在。实际上，藻类大小在1m50 m之间，经碘液固定后，下沉较快，所以静置时间一般可为之间，经碘液固定后，下沉较快，所以静置时间一般可为48h。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定分级沉淀法分级沉淀法v没有分液漏斗时，也可采取分级沉淀法。没有分液漏斗时，也可采取分级沉淀法。v沉淀后，用细小的玻璃管（直径小于沉淀后，用细小的玻璃管（直径小于2mm）借虹）借虹吸方法慢慢吸去上清液，注意不能搅动或吸出浮吸方法慢慢吸去上清液，注意不能搅动或吸出浮在表面和沉淀的藻类，虹吸管在水样的一端可用在表面和沉淀的藻类，虹吸管在水样的一端可用孔径为孔径为20 m的筛绢封盖。的筛绢封盖。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定分级沉淀法分级沉淀法v将剩余的藻液（约将剩余的藻液（约20mL）放入容积为）放入容积为50mL的试的试剂瓶中。试剂瓶事先在剂瓶中。试剂瓶事先在30mL处做好标记。用吸出处做好标记。用吸出的上层清液冲洗分液漏斗的上层清液冲洗分液漏斗23次，一起放入试剂次，一起放入试剂瓶中，定容到瓶中，定容到30mL。v需要长期保存的样品，应加入少许甲醛溶液，并需要长期保存的样品，应加入少许甲醛溶液，并用石蜡或用石蜡或parmar film膜封口。膜封口。v样品瓶上应写明采样日期，地点，采样体积和浓样品瓶上应写明采样日期，地点，采样体积和浓缩体积等缩体积等hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Identify and Countv对采到的优势种要求鉴定到种，一般到属。疑难种类要保存标对采到的优势种要求鉴定到种，一般到属。疑难种类要保存标本以备进一步鉴定。本以备进一步鉴定。v浮游植物计数框：由玻璃条组成的方框，面积为浮游植物计数框：由玻璃条组成的方框，面积为20mm20mm，容量为，容量为0.1mL，框内划分为横直各，框内划分为横直各10行格，共行格，共100个小方格。个小方格。v将计数样品充分摇匀后，迅速吸取将计数样品充分摇匀后，迅速吸取0.1mL样品至计数框中，盖上样品至计数框中，盖上盖玻片。盖玻片。v计数框内应无气泡，也不应有样品溢出。计数框内应无气泡，也不应有样品溢出。v气温高时，为了防止在长时间计数过程中水分蒸发而出现气泡，气温高时，为了防止在长时间计数过程中水分蒸发而出现气泡，可在盖玻片四周封以液体石蜡。可在盖玻片四周封以液体石蜡。v计数时，显微镜的目镜可用计数时，显微镜的目镜可用10，物镜用，物镜用40，但根据情况可加，但根据情况可加以变动。以变动。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Count Methodsv行格法：对计数框上的第二行、五行和八行，三行共对计数框上的第二行、五行和八行，三行共30格小方格进行计数，格小方格进行计数，现已较少采用。现已较少采用。v视野法：利用显微镜的目镜视野来选取计数的面积。先用台微尺量得在一利用显微镜的目镜视野来选取计数的面积。先用台微尺量得在一定放大倍数下的视野直径，然后按圆面积公式求得视野面积。定放大倍数下的视野直径，然后按圆面积公式求得视野面积。v应利用计数框上的方格或显微镜机械移动台上的标尺刻度，使选取的视野在应利用计数框上的方格或显微镜机械移动台上的标尺刻度，使选取的视野在计数框上均匀分布。计数框上均匀分布。v计数的视野数目应根据样品中浮游植物数量的多少确定。一般计数计数的视野数目应根据样品中浮游植物数量的多少确定。一般计数100500个视野，使所得的浮游植物计数值至少在个视野，使所得的浮游植物计数值至少在300以上。可以先计数以上。可以先计数100个视野，个视野，如计数后数值太少，再增加如计数后数值太少，再增加100个，依此类推，计数的视野应均匀分布在计个，依此类推，计数的视野应均匀分布在计算框的全部面积内。算框的全部面积内。为减少工作量，一般不对整个计数框内水样中的浮游植物都计数，而只选取其中一部分样品计数。选取过程是一个次级抽样过程，故要考虑抽样的大小和代表性，常用行格法和视野法。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Calculationv把计数结果换算为原来所采的水样中浮游植物把计数结果换算为原来所采的水样中浮游植物数量时，用下列计算公式：数量时，用下列计算公式：式中：N浮游植物数量，cell/mL A计数框面积，mm2 Ac计数面积或视野面积，mm2 Vs 1L原水样沉淀浓缩后的体积，mL Va计数框的容量，mL n 计数所得的浮游植物数目，cellhydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定Notev采用某种计数方法后，不要随意改变，以保证结果的可比采用某种计数方法后，不要随意改变，以保证结果的可比性。性。v若遇到一个浮游植物个体或细胞的一部分在行格或视野内，若遇到一个浮游植物个体或细胞的一部分在行格或视野内，另一部分在行格或视野外，则可自行规定。如：在行格上另一部分在行格或视野外，则可自行规定。如：在行格上线或视野上半圈的个体或细胞不计数，而在下线或下半圈线或视野上半圈的个体或细胞不计数，而在下线或下半圈的细胞计数。的细胞计数。v计数前应对样品做定性观察，以熟悉主要种类及其形态特计数前应对样品做定性观察，以熟悉主要种类及其形态特点。点。v计数时应把注意力集中到主要种类，对数量极少的稀有种计数时应把注意力集中到主要种类，对数量极少的稀有种类，一时确定不了归属的，可先计数，需要时再鉴定种类。类，一时确定不了归属的，可先计数，需要时再鉴定种类。v当某一个或几个优势种的数目非常多时，可用计数器，对当某一个或几个优势种的数目非常多时，可用计数器，对其单独计数。必要时先统计这些种类的数目，再看其它种其单独计数。必要时先统计这些种类的数目，再看其它种类。类。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定l对于比较难判断细胞数的群体，则任选20 个个体在高倍下观察，测出细胞数，取平均值。l由于硅藻在直接观察时无法定种，所以计数时先计算总的硅藻细胞数，然后将部分样品酸处理后在油镜下定种并计算出各种硅藻间细胞数的比例。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定群体和丝状体的计算方法群体和丝状体的计算方法v对丝状体和一些较小的群体，可以先计算个体对丝状体和一些较小的群体，可以先计算个体数，然后求出该种类的个体的平均细胞数，进数，然后求出该种类的个体的平均细胞数，进行换算。行换算。v对形成对形成“水华水华”的优势种类，如：微囊藻，计的优势种类，如：微囊藻，计数前可用加碱、加热、超声波振荡等方法使其数前可用加碱、加热、超声波振荡等方法使其散开成为单个细胞或少数细胞的群体。散开成为单个细胞或少数细胞的群体。计数的单位可以用个体或细胞表示。用个体数表示，计数时较省力，但由于藻体有的是单细胞，有的是数目相差悬殊的细胞组成的群体，因此用个体数表示不及用细胞数表示精确。hydrobio.jnu.edu.cn藻类的采集和鉴定