流式高通量多因子检测技术及应用流式高通量多因子检测技术及应用 题纲题纲IIII. AimPlex AimPlex多因子检测技术的原理和特质多因子检测技术的原理和特质III.需具备什么样的实验条件，才能开展需具备什么样的实验条件，才能开展AimPlexAimPlex检测工作？检测工作？ VI. AimPlexAimPlex产品应用产品应用 I.多因子检测技术在生物医药研究中的应用多因子检测技术在生物医药研究中的应用 流式多因子检测技术流式多因子检测技术在生物医药研究中的应用在生物医药研究中的应用细胞因子与疾病细胞因子与疾病免疫调节作用：免疫调节作用：调节着每个细胞乃至组织活动；直接参与了细胞间相互作用以及细胞外微环境的变化参与疾病发生：参与疾病发生：类风湿性关节炎； 强直性脊柱炎SLE； 银屑病； 细胞因子风暴以Th淋巴细胞为枢纽的细胞因子调节网细胞因子与疾病治疗细胞因子与疾病治疗多因子检测技术多因子检测技术xMapR&DMillplexBioplexLuminex平台平台CBAFlowcytomix流式流式基基础上上AimPlex流式多重定量技术流式多重定量技术 -检测细胞表面蛋白或检测细胞表面蛋白或胞内蛋白胞内蛋白多因子检测与疾病研究多因子检测与疾病研究肿瘤生物学免疫相关代谢心血管疾病干细胞研究神经生物学肿瘤移植细胞凋亡更少样本更少样本高通量高通量更短时间更短时间多因子检测涵盖了很多研究领域多因子检测涵盖了很多研究领域多因子检测产品广泛应用于疾病的研究多因子检测产品广泛应用于疾病的研究 肿瘤肿瘤 ( (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等) ) 心血管疾病心血管疾病 ( (如如高血压高血压、动脉粥样硬化动脉粥样硬化) ) 糖尿病、肥胖症糖尿病、肥胖症 自闭症、老年痴呆症自闭症、老年痴呆症 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 ( (系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、 过敏反应等过敏反应等) ) 炎症感染炎症感染 ( (如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等) ) 传染性疾病传染性疾病 ( (如艾滋病、肝炎等如艾滋病、肝炎等) ) 其它其它 ( (如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银 屑病等屑病等) )多因子检测应用领域多因子检测应用领域开发研究开发研究大学大学政府专业管理机构政府专业管理机构医学中心医学中心药物研发药物研发生物技术企业生物技术企业药物公司药物公司临床研究临床研究医院医院医学中心医学中心早期诊断早期诊断临床实验室临床实验室大学检测测试中心大学检测测试中心实验室诊断实验室诊断医院医院专业检测机构专业检测机构所有流式细胞仪客户所有流式细胞仪客户 基础医学、生物学研究 基础免疫学研究 细胞生物学如信号传导、凋亡 癌症研究、传染病等药物开发和疗效研究什么是什么是AimPlexAimPlex多因子检测技术？多因子检测技术？AimPlexAimPlex多因子检测技术：多因子检测技术：利用不同尺寸、不同荧光强度的多个微球群实现多因子的检测利用该技术，配合任何一台配备488nm激发光的流式细胞仪，即可实现24个指标的同步检测。 AimPlexAimPlex技术原理技术原理流式细胞仪检测荧光，从而实现对蛋白抗原的检测；结合抗原标准品的标准曲线，可实现对蛋白抗原的定量检测。 一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，加入检测抗体，形成“三明治”复合物45123不同大小，不同荧光强度的捕获微球，在FCM FL4检测不同的目标蛋白PE 荧光强度即为靶蛋白量456123微球微球FL2 (Reporter Parameter)FL4(Differentiator Parameter)不同大小种类微球分布不同大小种类微球分布AimPlexAimPlex检测过程检测过程60分钟的抗原抗体孵育30分钟生物素化检测抗体孵育20分钟链霉素亲和素-PE孵育具有具有488nm488nm激发光源激发光源AimPlexAimPlex结果的提取和分析结果的提取和分析流式细胞仪流式细胞仪： 几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要FCAP Array 3.0 FCAP Array 3.0 软件可计算软件可计算被测样本中待检物的浓度被测样本中待检物的浓度标准曲线分析标准曲线分析FCAP array 3.0 Softwaren n曲线自动生成曲线自动生成n n线性或对数形式显示线性或对数形式显示n n回归曲线拟合回归曲线拟合pg/mLMFI110100100010000110100100010000100000Standard Curves - Human 7-PlexIL-4IFNgIL-2TNFaIL-6IL-8IL-12p70Human Th1/Th2 Standard: Blank样本检测举例样本检测举例Human Th1/Th2 Standard: 14 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 42 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 123 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 370 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/mlHuman Th1/Th2 unknown 1Human Th1/Th2 unknown 2AimPlexAimPlex优势优势l 高通量，多指标高通量，多指标同时检测一个标本多达24个指标l 需要标本量少需要标本量少节省样品（25 L）、试剂、实验空间、仪器设备l 选择灵活选择灵活研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标l 耗时短耗时短整个过程只需3个多小时l 要求低要求低-适用于所有含488激发光的流式细胞仪l 宽范围，高灵敏宽范围，高灵敏 -更宽检测范围，高灵敏度，高特异性，高重复性更宽的检测范围更宽的检测范围pg/mLMFI1.00100.0010000.001.0010.00100.001000.0010000.00Full Range Std CurveLowerconcentrationrangestandardcurveforbettercalculationofsampleswithverylowAFPconcentration药明康德客户需求：检测小鼠肝癌模型的AFP浓度AimPlexandLuminex产品对比Luminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.97160500100015000200400600800IFNLuminex (pg/mL)AimPlex(pg/mL)R2=0.96990500100015000200400600800IL-10Luminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.969405000100000200040006000800010000IL-6Luminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.9292010002000300001000200030004000TNFLuminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.939102004000100200300400IL-17ALuminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.980701020300.05.010.015.0IL-4Luminex (pg/mL)AimPlex (pg/mL)R2=0.99550.002000.00 4000.00 6000.000200040006000IL-2人外周血不同处理后分别用AimplexTh1/Th2/Th17(7个指标）检测和Luminex试剂盒检测结果对比AimPleAimPlex x ELISAELISAAimPlexELISA样本量15uL350-700ul所需检测板1块7块操作时间4h47h检测范围2-5000pg/mL2-1500pg/ml反应体系同一不同 价格价格 10800元元18000元元例子：例子：40个样本个样本 7个指标：个指标：IFN-gamma,IL-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha可供测试的样品来源高度多样化可供测试的样品来源高度多样化血清血清血浆血浆脑脊液脑脊液条件培养基条件培养基各种细胞裂解液各种细胞裂解液各种组织裂解液各种组织裂解液 - 肺、支气管、子宫内膜组织、肝、脾、脑、宫颈等组织。 泪液泪液前列腺液前列腺液 初乳、初乳、初乳、初乳、羊水羊水各种各种脓肿液脓肿液脓肿液脓肿液腹水、肝囊肿液腹水、肝囊肿液支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液骨裂解液、滑液等骨裂解液、滑液等龈沟液、龈沟液、唾液、痰液唾液、痰液血凝块血凝块普通常见样品普通常见样品非常规样品非常规样品几乎所有液质几乎所有液质( (fluids) )的生物样本的生物样本！小鼠血凝块样本检测小鼠血凝块样本检测Serumandbloodclotlysatesamplesofmicetreatedwithorwithout(Con)LPSweretestedusingAimPlexmousecytokineassays.Thisexperimentindicatesthatbesidesserum,bloodclot(afterlysedwithAimPlexlysisbuffer)canbeusedformeasurementsofmanycytokinesinbloodandpreciousserumsamplescanbesavedforotherassays.Page35AimPlexAimPlex产品形式产品形式预混多因子单因子抗原标准品种属种属：人、小鼠、大鼠、灵长类，狗：人、小鼠、大鼠、灵长类，狗低低价价定定制制 Th1/Th2/Th17 7-plex Th1/Th2/Th17 7-plex kitkitT辅助细胞对免疫系统的建立和功能健全起重要作用。AimPlex人和鼠及NHPTh17多重检测系列产品可同步定量检测由Th1， Th2，Th17和Treg细胞分泌的细胞因子，为Th细胞功能鉴定提供有效的检测工具。IFNgamma,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IL-17AandTNFalpha需具备什么样的实验条件，才能开需具备什么样的实验条件，才能开展多因子检测工作？展多因子检测工作？ AimPlexAimPlex易于在普通实验易于在普通实验室开展室开展AimPlexFilterPlateWasherAimPlexAimPlex不同应用领域试剂盒不同应用领域试剂盒应用分组名称应用分组名称候候选选待待检检物物呼吸道炎症组sCD30,sE-selectin,sICAM-1,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,IFN-gamma,MCP-1,TNF-alpha,sVCAM-1,NGF特应性皮炎组sCD30,sICAM-1,IL-4,IL-5,IL-13,TNF-alpha扩充的心血管组Adiponectin,sCD40L,CRP,sE-selectin,sICAM-1,IL-1beta,IL-6,IL-8,MCP-1,MPO,PAI-1,sP-selectin,TNF-alpha,t-PA,sVCAM-1糖尿病组Adiponectin,CRP,sICAM-1,IFN-alpha,IFN-gamma,Iso-Insulin,IL-1beta,IL-6,IL-8,IL-10,Leptin,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,NGF,PAI-1,Resistin,TNF-alpha,TNF-beta,t-PA生长和分化组G-CSF,IFN-alpha,IFN-gamma,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-23,MCP-1,NGF,TNF-alpha免疫调控组sCD30,sCD40L,IL-4,IL-6,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-23,IFN-alpha,IFN-gamma,TNF-alpha炎症组sCD30,sCD40L,CRP,sE-selectin,G-CSF,sICAM-1,IFN-alpha,IFN-gamma,IL-1beta,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,IL-23,MCP-1,MIG,MIP-1alpha,MIP-1beta,sPECAM-1,sP-selectin,TNF-alpha,sTNF-R1,sVCAM-1多发性硬化症组sCD30,sICAM-1,IFN-gamma,IL-4,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-17A,MCP-1,MIP-1beta,TNF-alpha,TNF-beta,sVCAM-1AimPlexAimPlex不同应用领域试剂盒不同应用领域试剂盒扩充的肥胖症组Adiponectin,sCD40L,CRP,sICAM-1,IL-6,Leptin,MCP-1,MPO,NGF,OPG,PAI-1,Resistin,TNF-alpha,sTNF-R1疼痛组sICAM-1,IL-1beta,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IFN-gamma,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,NGF,TNF-alpha,sVCAM-1先兆子痫组Adiponectin,IFN-gamma,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,TNF-alpha类风湿性关节炎组sCD30,sE-selectin,sICAM-1,sICAM-3,IFN-alpha,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,IL-13,IL-17A,IL-23,MCP-1,MIP-1alpha,sP-selectin,TNF-alpha,sVCAM-1脓毒症/败血性休克症组Sepsis(CRP,sE-selectin,IL-1beta,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12p70,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,PAI-1,TNF-alpha,sVCAM-1),Septicshock(IL-1beta,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-13,IFN-gamma,G-CSF,MCP-1,PAI-1,TNF-alpha)系统性红斑狼疮组sCD30,sCD40L,IFN-alpha,IL-6,IL-10,IL-12p70,IL-13,NGF,TNF-alpha,sVCAM-1肿瘤坏死因子/肿瘤坏死因子受体组sCD30,sCD40L,NGF,OPG,TNF-alpha,TNF-beta,sTNF-R1移植组CRP,ICAMandVCAM,sVCAM-1,sCD30,sICAM-1,IFN-alpha,IFN-gamma,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,MCP-1,MIG,MIP-1alpha,TNF-alpha肿瘤生物学组sCD30,sCD40L,IFN-gamma,IL-1beta,IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,IL-10,IL-23,MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta,NGF,TNF-alpha,TNF-beta,sICAM-1,sICAM-3,sE-selectin,sP-selectinandsVCAM-1