植物组培基本操作图解2021/3/241授课：XXX 植物组织培养的内容植物组织培养的内容 植物组织培养包括以植物和它的离植物组织培养包括以植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体为外植体器官、组织、细胞和原生质体为外植体的离体无菌培养，拥有几种不同水平体的离体无菌培养，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞和原生质的培养技术。的、细胞和原生质的培养技术。（植株（植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养细胞培养、原生质体培养 ）2021/3/242授课：XXX植物组织培养中的重要概念植物组织培养中的重要概念l愈伤组织：愈伤组织：指由植物的一种组织或器官指由植物的一种组织或器官经历脱分化形成的原始胚样组织，它具经历脱分化形成的原始胚样组织，它具有再分化成为完整植物体的潜能；有再分化成为完整植物体的潜能；l外植体：外植体：植物组织培养中用来进行无菌植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体等；细胞和原生质体等；2021/3/243授课：XXX 无无菌菌和和消消毒毒：无无菌菌操操作作要要注注意意：每每次次操操作作前前，将将双双手手用用酒酒精精棉棉球球擦擦拭拭消消毒毒；解解剖剖针针、解解剖剖刀刀等等金金属属工工具具用用火火焰焰烧烧过过灭灭菌菌，在在酒酒精精中中冷冷却却，再再将将酒酒精精烧烧去去方方可可使使用用；尽尽量量减减少少无无菌菌三三角角瓶瓶和和培培养养皿皿在在空空气气中中的的暴暴露露时时间间；所所有有无无菌菌操操作作尽尽量量快快速速完完成，并请在酒精灯附近进行。成，并请在酒精灯附近进行。2021/3/244授课：XXX组组 培培 实实 验验 用用 品品2021/3/245授课：XXX一、无菌苗的快速切繁一、无菌苗的快速切繁1 1、点点着着酒酒精精灯灯，双双手手擦擦拭拭消消毒毒，打打开开长长有有无无菌菌苗苗的的三三角角瓶瓶，三三角角瓶瓶瓶瓶口口使使用用前前后后需需在在酒酒精精灯灯外外焰焰上烧过灭菌。上烧过灭菌。2 2、用用灭灭菌菌的的镊镊子子轻轻轻轻捏捏出出幼幼苗苗，放放在在无无菌菌的的培培养养皿皿中中，用用灭灭菌菌的的剪剪刀刀将将主主茎茎剪剪成成若若干干0.5-1cm0.5-1cm的的小小段段，要要求求每每段段至至少少包包含含一一个个生生长长点点，接接入入盛盛有有MSMS培培养养基基的的三三角角瓶瓶中中，每每一一个个切切段段必必须须直直接接接接触触培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。培养基，三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。3 3、在在光光照照培培养养箱箱中中，2525，1616小小时时光光照照条条件件下下培培养养4 4周，可长成完整植株。周，可长成完整植株。2021/3/246授课：XXX1 1、点着酒精灯、点着酒精灯2021/3/247授课：XXX2 2、双手擦拭消毒、双手擦拭消毒2021/3/248授课：XXX3 3、剪刀灭菌、剪刀灭菌外焰外焰2021/3/249授课：XXX4 4、酒精中冷却、酒精中冷却2021/3/2410授课：XXX5 5、把酒精烧去、把酒精烧去2021/3/2411授课：XXX6 6、打开三角瓶、打开三角瓶铝箔纸的拿法铝箔纸的拿法a a2021/3/2412授课：XXX8 8、瓶口在火焰上烧过、瓶口在火焰上烧过2021/3/2413授课：XXX9 9、铝箔纸的放法、铝箔纸的放法2021/3/2414授课：XXX1111、镊出苗、镊出苗2021/3/2415授课：XXX12、放入培养皿中、放入培养皿中2021/3/2416授课：XXX13、幼幼苗苗形形态态生生长长点点2021/3/2417授课：XXX14、剪取茎段、剪取茎段2021/3/2418授课：XXX15、剪好的苗、剪好的苗2021/3/2419授课：XXX培养皿的拿法培养皿的拿法2021/3/2420授课：XXX16、茎段接种、茎段接种a2021/3/2421授课：XXX17、茎段接种茎段接种b2021/3/2422授课：XXX18、接种好的苗、接种好的苗a2021/3/2423授课：XXX19、接种好的苗、接种好的苗b2021/3/2424授课：XXX20、重新封好瓶口、重新封好瓶口a2021/3/2425授课：XXX21、重新封好瓶口、重新封好瓶口b2021/3/2426授课：XXX22、重新封好瓶口、重新封好瓶口c2021/3/2427授课：XXX二二 愈伤组织的培养愈伤组织的培养、挑选生长健康的无菌叶或茎，在、挑选生长健康的无菌叶或茎，在灭菌的培养皿中灭菌的培养皿中剪成剪成0.5-1cm0.5-1cm2 2的的小块或相当大小的茎段小块或相当大小的茎段( (造成伤口造成伤口), ), 接种在盛有接种在盛有MSMS培养基的培养皿中培养基的培养皿中将培养皿用封口膜封住。将培养皿用封口膜封住。、在光照培养箱中，、在光照培养箱中，2525下下,16,16小小时光照，培养两周，可形成愈伤组时光照，培养两周，可形成愈伤组织。织。2021/3/2428授课：XXX1、将苗剪出伤口、将苗剪出伤口2021/3/2429授课：XXX2、剪好的叶片和茎段、剪好的叶片和茎段2021/3/2430授课：XXX3、打开培养皿、打开培养皿2021/3/2431授课：XXX5、愈伤组织接种、愈伤组织接种2021/3/2432授课：XXX6、培养皿封口、培养皿封口2021/3/2433授课：XXX三、苗的茎尖培养三、苗的茎尖培养、取幼苗10株，剪取1cm左右的茎尖浸入70%的酒精1分钟消毒液中15分钟无菌水冲洗5次灭菌的滤纸上吸干放入灭菌的培养皿。、在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥，挑取带着两至三个叶原基的生长锥。移到盛有B5培养基的培育皿中，诱导愈伤组织形成，用封口膜将培养皿封好。、在恒温培养箱中，26下,培养六周，可形成簇生芽丛。2021/3/2434授课：XXX1、幼苗形态、幼苗形态2021/3/2435授课：XXX2、剪取茎尖、剪取茎尖茎尖茎尖2021/3/2436授课：XXX3、剪好的茎尖、剪好的茎尖2021/3/2437授课：XXX4、倒入、倒入70%酒精处理酒精处理1分钟分钟2021/3/2438授课：XXX5、倒去酒精、倒去酒精2021/3/2439授课：XXX6、倒入消毒液、倒入消毒液(一般为升汞）处理一般为升汞）处理15分钟分钟2021/3/2440授课：XXX7、倒去消毒液、倒去消毒液2021/3/2441授课：XXX8、无菌水冲洗、无菌水冲洗5次次2021/3/2442授课：XXX9、取出茎尖、取出茎尖2021/3/2443授课：XXX10、在滤纸上吸干水分、在滤纸上吸干水分2021/3/2444授课：XXX11、双双目目解解剖剖镜镜下下解解剖剖茎茎尖尖2021/3/2445授课：XXX显显微微解解剖剖镜镜使使用用图图解解目镜目镜放大倍数放大倍数旋钮旋钮物镜物镜 解剖载物台解剖载物台焦距旋钮焦距旋钮底光源开关底光源开关上光源调节上光源调节旋钮旋钮2021/3/2446授课：XXXThank you!2021/3/2447