中中 药药 化化 学学2021/4/261本章基本内容 一、概述一、概述 二、结构类型二、结构类型 三、糖苷分类三、糖苷分类 四、糖和苷的物理性质四、糖和苷的物理性质 五、糖的化学性质五、糖的化学性质 六、苷键的裂解六、苷键的裂解 七、糖的提取分离七、糖的提取分离 八、糖的鉴定和糖链结构的测定八、糖的鉴定和糖链结构的测定 2021/4/262一、概述糖类又称碳水化合物（carbohydrates），是植物光合作用的初生产物，是一类丰富的天然产物，如：蔗糖、粮食(淀粉)、棉布的棉纤维等。糖类、核酸糖类、核酸、蛋白质蛋白质、脂质脂质生命活动所必需的四大类化合物。化学结构：多羟基内半缩醛(酮)及其缩聚物。根据其分子水解反应的情况，可以分为单糖、低聚糖和多糖。2021/4/263一、概述单糖：不能水解的最简单的多羟基内半缩醛(酮)。如葡萄糖等。低聚糖：水解后生成29个单糖分子的糖。如：蔗糖（D-葡萄糖-D果糖）麦芽糖（葡萄糖14葡萄糖）多糖：水解后能生成多个单分子的，称为多糖。如：淀粉、纤维素等2021/4/264二、结构类型糖的表示式糖的表示式单糖是多羟基醛或酮。从三碳糖至八碳糖天然界都有存在。以Fischer式表示如下：2021/4/265二、结构类型单糖在水溶液中形成半缩醛环状结构，即成呋喃糖和吡喃糖。具有六元环结构的糖吡喃糖（pyranose）具有五元环结构的糖呋喃糖（furanose） 糖处游离状态时用Fischer式表示 苷化后成环用Haworth式表示2021/4/266二、结构类型FischerFischer与与HaworthHaworth的转换及其相对构型的转换及其相对构型2021/4/267二、结构类型Fischer式式：（C1与C5的相对构型）C1-OH与原C5（六碳糖）或C4（五碳糖）-OH，顺式为，反式为。Haworth式：式：C1-OH与C5（或C4）上取代基之间的关系：同侧为，异侧为。2021/4/268二、结构类型糖的绝对构型（糖的绝对构型（D D、L L）以-OH甘油醛为标准，将单糖分子的编号最大的不对称碳原子的构型与甘油醛作比较而命名分子构型的方法。2021/4/269二、结构类型Fischer式中最后第二个碳原子上-OH向右的为D型，向左的为L型。Haworth式中C5向上为D型，向下为L型。2021/4/26109、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202410、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/242024/9/242024/9/249/24/20243:40:23PM11、人总是珍惜为得到。2024/9/242024/9/242024/9/24Sep-2424-Sep-2412、人乱于心，不宽余请。2024/9/242024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202413、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202414、抱最大的希望，作最大的努力。24九月20242024/9/242024/9/242024/9/2415、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202416、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/242024/9/2424September202417、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/24二、结构类型戊醛糖和已酮糖的绝对构型判断：吡喃型Haworth式，由于原构型标准（C4-OH和C5-OH）不参与成环，故可直接根据它们的位置判断构型。2021/4/26129、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202410、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/242024/9/242024/9/249/24/20243:40:23PM11、人总是珍惜为得到。2024/9/242024/9/242024/9/24Sep-2424-Sep-2412、人乱于心，不宽余请。2024/9/242024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202413、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202414、抱最大的希望，作最大的努力。24九月20242024/9/242024/9/242024/9/2415、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202416、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/242024/9/2424September202417、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/24二、结构类型即：戊醛糖的C4或已酮糖的C5-OH处于环上者为L构型；环下者为D构型。 习惯上将习惯上将D型糖中型糖中C1-OH处环上者为处环上者为 体，环下者体，环下者为为 体。在体。在L型糖中相反。型糖中相反。D-木糖（D-xylose）D-果糖（D-fructose）452021/4/2614二、结构类型已醛糖由Fischer转成呋喃型的Haworth，由于C5-C6部分成为环外侧链，判断构型时仍以C5为标准，C5-R者为D型糖；C5-S者为L型糖。 同样，将同样，将D型糖中型糖中C1-OH处环上者为处环上者为 体，环下者体，环下者为为 体。在体。在L型糖中相反。型糖中相反。RD-呋喃半乳糖呋喃半乳糖2021/4/2615二、结构类型环的构象环的构象2021/4/2616二、结构类型Angyal用总自由能来分析构象式的稳定性，比较二种构象式的总自由能差值，能量低的是优势构象。如：葡萄糖的二种构象式的比较：2021/4/2617三、糖苷分类糖匀体糖匀体均由糖组成的物质。如单糖、低聚糖、多糖等。1常见单糖 2021/4/2618三、糖苷分类2021/4/2619三、糖苷分类2氨基糖氨基糖 是指单糖的伯或仲醇基置换成氨基的糖类。2021/4/2620三、糖苷分类3糖醇糖醇 单糖的醛或酮基醛或酮基还原成羟基羟基后所得的多元醇。4去氧糖去氧糖 单糖分子的一个或二个羟基为氢原子代替的糖。2021/4/2621三、糖苷分类5糖醛酸糖醛酸单糖分子中伯醇基氧化成羧基伯醇基氧化成羧基的化合物。2021/4/2622三、糖苷分类糖杂体糖杂体 糖与非糖组成的化合物苷苷的分类： 1按苷原子不同分类按苷原子不同分类氧苷如：红景天苷2021/4/2623三、糖苷分类氮苷：如腺苷。硫苷：如萝卜苷。碳苷：如牡荆素。2021/4/2624三、糖苷分类2按苷元不同分类按苷元不同分类如：黄酮苷、蒽醌、香豆素、强心苷、皂苷等3按苷键不同分类按苷键不同分类醇苷：是通过醇羟基与糖端基羟基脱水而成的苷。如红景天苷。酚苷：是通过酚羟基而成的苷。如天麻苷。酯苷：苷元以-COOH和糖的端基碳相连接的是酯苷。如山慈菇苷A。氰苷：是指一类羟腈的苷。如野樱苷。2021/4/2625三、糖苷分类2021/4/2626三、糖苷分类4按端基碳构型分按端基碳构型分苷，多为L型；苷，多为D型。5按连接单糖个数分按连接单糖个数分1个糖单糖苷2个糖双糖苷3个糖叁糖苷2021/4/2627三、糖苷分类6按糖链个数分按糖链个数分1个位置成苷单糖链2个位置成苷双糖链7按生物体内存在分按生物体内存在分原级苷在植物体内原存在的苷；次级苷原级苷水解掉一个糖或结构发生 改变。2021/4/2628四、糖和苷的物理性质溶解性溶解性糖小分子极性大，水溶性好聚合度增高水溶性下降。多糖难溶于冷水，或溶于热水成胶体溶液。单糖极性单糖极性 双糖极性双糖极性 （与羟基和碳的分担比有关，即按-OH/C的分担情况而定）苷亲水性（与连接糖的数目、位置有关）苷元亲脂性2021/4/2629四、糖和苷的物理性质味觉味觉单糖低聚糖甜味。多糖无甜味（随着糖的聚合度增高，则甜味减小）苷类苦、甜等 （人参皂苷）（甜菊苷） 2021/4/2630四、糖和苷的物理性质旋光性及其在构型测定中的应用旋光性及其在构型测定中的应用具有多个不对称碳原子用于苷键构型的测定（即、苷键）。多数苷类呈左旋。利用旋光性旋光性 测定苷键构型测定苷键构型KlyneKlyne法法： 将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷的糖的一对甲苷的分子旋光度进行比较，数值上相接近的一个便是与之有相同苷键的一个。 2021/4/2631五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应 氧化反应氧化反应单糖的分子有醛（酮）、伯醇、仲醇和邻二醇等结构，氧化条件不同其产物也不同。如：2021/4/2632五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应糖分子化学反应的活泼性： 端基碳原子端基碳原子 伯碳伯碳 仲碳仲碳（即C1-OH、C6-OH、C2 C3 C4-OH）以过碘酸反应为例来了解糖的氧化反应的应用过碘酸反应主要作用于： 邻二醇、-氨基醇、-羟基醛（酮）、邻二酮和某些活性次甲基等结构。 2021/4/2633五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应邻羟基：2021/4/2634五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应-羟基酮：-氨基醇：邻二酮：2021/4/2635五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应反应特点：反应特点：反应定量进行（试剂与反应物基本是1:1）；在水溶液中进行或有水溶液（否则不反应）；反应速度：顺式 反式（因顺式易形成环式中间体）；游离单糖产物及消耗过碘酸用Fischer式计算; 成苷时糖产物及消耗过碘酸用Haworth式计算;在异边而无扭转余地的邻二醇不起反应。2021/4/2636五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应FischerFischer式和式和HaworthHaworth式式消耗过碘酸的计算： 2021/4/2637五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应在异边无扭转余地的邻二醇： 2021/4/2638五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应用途：用途：推测糖中邻二推测糖中邻二-OH多少；多少； （试剂与反应物基本是（试剂与反应物基本是1:1）；）；同一分子式的糖，推测是吡喃糖还是呋喃糖；同一分子式的糖，推测是吡喃糖还是呋喃糖； 2021/4/2639五、糖的化学性质 氧化反应氧化反应推测低聚糖和多聚糖的聚合度；推测1,3连接还是1,4连接（糖与糖连接的位置）2021/4/2640五、糖的化学性质 糠醛形成反应糠醛形成反应糠醛形成反应糠醛形成反应（Molish反应） 2021/4/2641五、糖的化学性质 糠醛形成反应糠醛形成反应Molish反应： 样品样品 + + 浓浓H H2 2SOSO4 4 + - + -萘酚萘酚 棕色环棕色环多糖、低聚糖、单糖、苷类Molish反应= ？ 2021/4/2642五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应羟基反应羟基反应糖的-OH反应醚化、酯化和缩醛（酮）化。反应活性：最高的半缩醛羟基（C1-OH）其次是伯醇基（C6-OH）仲醇次之。（伯醇因其处于末端的空间，对反应有利，因此活性高于仲醇。） 2021/4/2643五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应1醚化反应（甲基化）醚化反应（甲基化）Haworth法（不常用）含糖样品+ Me2SO4 + 30%NaOH 醇-OH全甲基化全甲基化（需反复68次）判断反应是否完全的方法：甲基化物可用红外光谱测试，直到无-OH吸收峰为止。制备成甲苷用限量试剂，即克分子比11时，可得甲苷。2021/4/2644五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应Purdie法 样品样品 + MeI + Ag+ MeI + Ag2 2O O 全甲基化（醇全甲基化（醇-OH-OH）只能用于苷，不宜用于还原糖（即有C1-OH的糖）。因Ag2O有氧化作用，可使C1-OH氧化。Hakomori法（箱守法） 样品样品 + DMSO + NaH + MeI + DMSO + NaH + MeI 全甲基化全甲基化（一次即可）该反应是在非水溶剂中，即二甲基亚砜（DMSO）溶液中进行反应。2021/4/2645五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应重氮甲烷法（CH2N2） 样品 + CH2N2 / Et2O + MeOH 部分甲基化部分甲基化 （-COOH、-CHO等） 2酰化反应（酯化反应）酰化反应（酯化反应）羟基活性与甲基化反应相同，即（C1-OH、C6-OH、C3最难）（由于C2位取代后，引起的空间障碍，使得C3最难被酰化。） 利用酰化可判断糖上-OH数目、保护-OH等。 2021/4/2646五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应3缩酮和缩醛化反应缩酮和缩醛化反应酮或醛在脱水剂如矿酸、无水ZnCl2、无水CuSO4等存在下可与多元醇的二个有适当空间位置 的 羟 基 易 形 成 环 状 缩 酮 （ ketal） 和 缩 醛（acetal）。 酮酮类易与顺邻顺邻-OH生成五元环五元环状物 醛醛类易与1,3-双双-OH生成六元环六元环状物2021/4/2647五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应糖 + 丙酮 五元环缩酮(异丙叉衍生物) 糖 + 丙酮 六元环缩酮 (双异丙叉衍生物) 例：当糖具有有顺顺邻邻-OH时，其生成五元环状物（异丙叉衍生物）： 2021/4/2648五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应 当糖结构中无无顺顺邻邻-OH时，则易转变为呋喃糖结构，再生成五元环状物（异丙叉衍生物） 。 2021/4/2649五、糖的化学性质 羟基反应羟基反应糖 + 苯甲醛 六元环状缩醛 （苯甲叉衍生物）例如：葡萄糖甲苷 + 苯甲醛 (具1,3-OH结构)以上方法主要目的是保护-OH。2021/4/2650五、糖的化学性质 羰基反应羰基反应羰基反应羰基反应还原糖 + 苯肼 糖腙 （多为水溶性的）还原糖 + 3分子苯肼 糖脎 （较难溶于水） 2-去氧糖不能成脎（因C2上无-OH）。应用应用糖的鉴定、分离和纯化。 2021/4/2651五、糖的化学性质 硼酸络合反应硼酸络合反应硼酸络合反应硼酸络合反应糖的邻二-OH可与许多试剂生成络合物，借生成络合物的某些物理常数的改变，可以有助于糖的分离、鉴定和构型推定。重要的如：硼酸络合物、钼酸络合物、铜氨离子络合物等。糖 + 硼酸 络合物（酸性增加、可离子化）（H3BO3是接受电子对的Lewis酸）2021/4/2652五、糖的化学性质 硼酸络合反应硼酸络合反应硼酸络合反应的应用：络合后，中性可变为酸性，因此可进行酸碱中和滴定；可进行离子交换法分离；可进行电泳鉴定；在混有硼砂缓冲液的硅胶薄层上层析。 2021/4/2653六、苷键的裂解研究苷类的化学结构，必须了解苷元结构、糖的组成、糖和糖的连接方式，以及苷元和糖的连接方式等。为此必先使用某种方法使苷键切断。酸催化水解反应乙酰解反应碱催化水解和消除反应酶催化水解反应氧化开裂法（Smith降解法）2021/4/2654六、苷键的裂解 酸催化水解反应酸催化水解反应酸催化水解反应酸催化水解反应苷键属于缩醛结构，易为稀酸催化水解。水解反应是苷原子先质子化，然后断键生成阳碳离子或半椅型的中间体，在水中溶剂化而成糖。 2021/4/2655六、苷键的裂解 酸催化水解反应酸催化水解反应酸水解的规律：酸水解的规律：苷原子不同，酸水解难易顺序：N O S C （C-苷最难水解，从碱度比较也是上述顺序）呋喃糖苷较吡喃糖苷易水解。因五元呋喃环的颊性使各取代基处在重叠位置，形成水解中间体可使张力减小，故有利于水解。酮糖较醛糖易水解酮糖多为呋喃结构，而且酮糖端基碳原子上有-CH2OH大基团取代，水解反应可使张力减小。2021/4/2656六、苷键的裂解 酸催化水解反应酸催化水解反应吡喃糖苷中： 吡喃环C5上取代基越大越难水解，水解速度为：五碳糖 甲基五碳糖 六碳糖 七碳糖 C5上有-COOH取代时，最难水解 （因诱导使苷原子电子密度降低）氨基取代的糖较-OH糖难水解，-OH糖又较去氧糖难水解。 2,3-二去氧糖 2-去氧糖 3-去氧糖 羟基糖 2-氨基糖 2021/4/2657六、苷键的裂解 酸催化水解反应酸催化水解反应在构象相同的糖中:a键(竖键)-OH多则易水解。芳香属苷较脂肪属苷易水解。如：酚苷 萜苷、甾苷（因苷元部分有供电结构，而脂肪属苷元无供电结构）苷元为小小基团苷键横横键比竖竖键易水解易水解( e a ) （横键易质子化） 苷元为大大基团苷键竖竖键比横横键易水解易水解( a e ) （苷的不稳定性促使其易水解） 2021/4/2658六、苷键的裂解 乙酰解反应乙酰解反应乙酰解反应乙酰解反应1常用试剂：醋酐 + 酸 所用酸如：H2SO4、HClO4、CF3COOH或Lewis酸（ZnCl2、BF3）等。2反应条件：一般是在室温放置数天。3反应机理： 与酸催化水解相似，以CH3CO+(乙酰基，Ac）为进攻基团。 2021/4/2659六、苷键的裂解 乙酰解反应乙酰解反应乙酰解反应易发生糖的端基异构化。 2021/4/2660六、苷键的裂解 乙酰解反应乙酰解反应4反应速率： 苷键邻位有电负性强的基团（如环氧基）可使反应变慢。 -苷键的葡萄糖双糖的反应速率：（乙酰解易难程度） （16）（14）（13）（12） 2021/4/2661六、苷键的裂解 乙酰解反应乙酰解反应5用途酰化可以保护苷元上的-OH，使苷元增加亲脂性，可用于提纯和鉴定。乙酰解法可以开袭一部分苷键而保留另一部分苷键。 2021/4/2662六、苷键的裂解 碱催化水解碱催化水解碱催化水解和碱催化水解和消除反应消除反应一般苷键对稀碱是稳定的，但某些特殊的苷易为碱水解，如： 酯苷 酚苷 烯醇苷 -吸电子基取代的苷2021/4/2663六、苷键的裂解 碱催化水解碱催化水解C1-OH与C2-OH：反式易水解，其产物为1,6-葡萄糖酐； 顺式产物为正常的糖。利用水解产物可判断苷键构型 2021/4/2664六、苷键的裂解 碱催化水解碱催化水解-消除反应： 苷键的-位有吸电子基团者，使-位氢活化，在碱液中与苷键起消除反应而开裂，称。 作用机理： 在13或14连接的聚糖中，还原端的游离醛（或酮）邻位氢活化而与3-O-或4-O-苷键起消除反应。这样碱能使多糖还原端的单糖逐个被剥落，对非还原端则无影响。剥落生成的是-羟基糖酸。 2021/4/2665六、苷键的裂解 碱催化水解碱催化水解-消除反应作用过程：2021/4/2666六、苷键的裂解 碱催化水解碱催化水解用途：用途：可从多糖剥落反应生成的糖酸中了解还还原原糖糖的取代方式的取代方式。 3-O-代的糖可形成3-脱氧糖酸 4-O-代的糖可形成3-脱氧-2-羟甲基糖酸 二个以上取代的还原糖难生成糖酸 2021/4/2667六、苷键的裂解 酶催化水解反应酶催化水解反应酶催化水解反应酶催化水解反应用酶水解苷键可以获知苷键的构型，可保持苷元结构不变的真正苷元真正苷元。 酶专属性高，选择性地催化水解某一构型的苷。如：苦杏仁酶（emulsin）水解-葡萄糖苷键纤维素酶（cellulase）同上 麦芽糖酶（maltase）水解-葡萄糖苷键2021/4/2668六、苷键的裂解 氧化开裂法氧化开裂法氧化开裂法（氧化开裂法（SmithSmith降解法）降解法）可得到原苷元（除酶解外，其它方法可能得到的是次级苷元）试剂：过碘酸(HIO4)、四氢硼钠(NaBH4)、稀酸反应过程： 2021/4/2669七、糖的提取分离 提取提取提取提取主要为溶剂法水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖）糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，而采用冷热水、冷热稀醇等条件。 苷类分子的极性随着糖基的增多而增大。可根据其极性大小，来选择相适应的溶剂。 破坏或抑制植物体内酶的方法：采集新鲜材料迅速加热干燥冷冻保存等2021/4/2670七、糖的提取分离 分离分离分离分离1活性炭柱色谱2纤维素色谱3离子交换柱色谱4凝胶柱色谱5季铵氢氧化物沉淀法6分级沉淀或分级溶解法7蛋白质除去法2021/4/2671七、糖的提取分离 分离分离1活性炭柱色谱活性炭柱色谱概述用途用途分离水溶性物质较好如：氨基酸、糖类及某些苷类。特点：特点：（对于活性炭柱色谱） 上样量大，分离效果较好，适合大量制备； 来源容易，价格廉； 缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。 2021/4/2672七、糖的提取分离 分离分离分类分类：粉末状活性炭颗粒细，总表面积大，吸附力及吸附量大。颗粒状活性炭颗粒较上者大，吸附力及吸附量也较上者次之。绵纶-活性炭以锦纶为粘合剂，将粉末状活性炭制成颗粒，吸附力最弱。2021/4/2673七、糖的提取分离 分离分离活性炭对物质的吸附规律对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖单糖活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱顺序：H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液乙醇液 无机盐无机盐 二糖二糖 三糖三糖 多糖多糖 单糖等单糖等 2021/4/2674七、糖的提取分离 分离分离2纤维素色谱纤维素色谱原理与PC相同，属分配层析。溶剂系统：水、丙酮、水饱和的正丁醇等。 用水溶性的溶剂如HAc：H2O进行展开时，其原理属吸附层析。 2021/4/2675七、糖的提取分离 分离分离3离子交换柱色谱离子交换柱色谱除水提液中的酸、碱性成分和无机离子；制成硼酸络合物强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液洗脱）2021/4/2676七、糖的提取分离 分离分离4凝胶柱色谱常用商品名称及型号：葡聚糖凝胶（商品名：Sephadex G） G-10、G-15、G-200等10表示吸水量乘以10，即1.0ml/g的吸水量琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A）聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P）羟丙酰基交联葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）（亲脂性，可在有机溶剂中进行分离的分子筛） 2021/4/2677七、糖的提取分离 分离分离操作过程：除LH-20外，均在H2O中进行。将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）；待充分膨胀后装入层析柱；用洗脱液洗脱；收集、回收溶液，干燥。2021/4/2678七、糖的提取分离 分离分离洗脱溶剂的选择：分离中性物质水及电解质溶液（酸、碱、盐溶液及缓冲液）阻滞较大的组分水+有机溶液（水-甲醇、水-乙醇、水-丙酮等）LH-20LH-20可可用用有有机机溶溶液液进进行行溶溶胀胀（如：CHCl3、丁醇、二氧六环等）(适用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等) 2021/4/2679七、糖的提取分离 分离分离5季铵氢氧化物沉淀法季铵氢氧化物沉淀法季铵氢氧化物是一类乳化剂。 2021/4/2680七、糖的提取分离 分离分离6分级沉淀或分级溶解法分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐渐增大EtOH浓度，可得到各部分的沉淀物。 为使多糖稳定，多糖通常在pH=7时进行 酸性多糖在pH=24时进行 处理酸性多糖时，为防酸水解苷键，操作宜迅速。2021/4/2681七、糖的提取分离 分离分离7蛋白质除去法蛋白质除去法用分级沉淀法得到的多糖，常夹杂有较多的蛋白质，为除之，通常选择能使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如：酚、三氯乙酸、鞣酸等。注意：处理时间要短，温度要低。注意：处理时间要短，温度要低。（避免多糖降解）三氟三氯乙烷法和Sevag法（用氯仿：戊醇或丁醇4：1混合）在避免降解上有较好效果。2021/4/2682七、糖的提取分离 分离分离糖的提取分离实例地黄根中单糖和低聚糖的分离取鲜根热EtOH、H2O提阴阳离子交换树脂（除酸碱成分）得中性成分活性炭柱（15%HOAc处理）以H2O、稀EtOH（5、10、15、25%顺次洗脱）,经PC检定，合并D-葡萄糖D-半乳糖D-果糖蔗糖棉子糖甘露三糖水苏糖(四糖)毛蕊糖(五糖)2021/4/2683八、糖的鉴定和糖链结构的测定糖的鉴定1纸层析纸层析展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。常用水饱和的有机溶剂展开。如：正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW水饱和苯酚等溶剂系统。显色剂：邻苯二甲酸苯胺、硝酸银试剂(使还原糖显棕黑色)、三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色）、3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色）等。2021/4/2684八、糖的鉴定和糖链结构的测定2薄层层析薄层层析可用（硼酸液 + 无机盐）+ 硅胶 制板吸附剂：硅胶（用0.03M硼酸液或无机盐的水液代水制板）常用的无机盐：0.3M磷酸氢二钠或磷酸二氢钠0.02M乙酸钠0.02M硼酸盐缓冲液0.1M亚硫酸氢钠/H2O2021/4/2685八、糖的鉴定和糖链结构的测定硼酸与无机盐制板的特点：增加糖在固定相中的溶解度，使硅胶薄层吸附能力下降，利于斑点集中，又可增加样品的承载量。显色剂：除纸层析应用的以外，还用如：H2SO4/H2O或乙醇液 茴香醛-硫酸试剂 苯胺-二苯胺磷酸试剂 等 2021/4/2686八、糖的鉴定和糖链结构的测定3气相层析气相层析将糖制备成三甲基硅醚将糖制备成三甲基硅醚（增加其挥发性） 将醛糖用NaBH4还原成多元醇（避免形成端基异构体）制成乙酰化物或三氟乙酰化物。4液相色谱液相色谱填充材料化学修饰的硅胶优：不必制备成衍生物。适合分析对热不稳定、不挥发的低聚糖和多糖。 分析单糖和低聚糖，其灵敏度不及气相层析。 2021/4/2687八、糖的鉴定和糖链结构的测定5离子交换层析离子交换层析糖的硼酸络合物可进行离子交换层析优：不必制成衍生物，而直接用水溶液进行分离（与气相比较）糖自动分析仪：显色：3,5-二羟基甲苯-浓硫酸波长：425nm上样量：每种组成不超过1mg洗脱剂：四硼酸钾的缓冲溶液2021/4/2688八、糖的鉴定和糖链结构的测定糖链结构的测定主要解决的问题单糖的组成、糖之间的连接位置和顺序、苷键构型1单糖的组成单糖的组成 2单糖之间连接位置的决定单糖之间连接位置的决定3糖链连接顺序的决定糖链连接顺序的决定4苷键构型的决定苷键构型的决定513C-NMR在糖链结构测定中的应用在糖链结构测定中的应用 2021/4/2689八、糖的鉴定和糖链结构的测定1单糖的组成单糖的组成低聚糖、多糖的结构分析，首先要了解由哪些单糖所组成，各种单糖之间的比例如何。一一般般是是将将苷苷键键全全水水解解，用用PCPC检检出出单单糖糖的的种种类类，经显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比。经显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比。也可用GLC或HPLC对单糖定性定量。 GLC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作标准。 2021/4/2690八、糖的鉴定和糖链结构的测定2单糖之间连接位置的决定单糖之间连接位置的决定将糖链全甲基化水解甲基化单糖的定性和定量（气相层析）（甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置）13C-NMR测定：主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。2021/4/2691八、糖的鉴定和糖链结构的测定3糖链连接顺序的决定缓和水解法：将糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序。质谱分析。4苷键构型的决定分子旋光差（klyne法）酶催化水解方法1H-NMR判断糖苷键的相对构型其它2021/4/2692八、糖的鉴定和糖链结构的测定1H-NMR判断糖苷键的相对构型在糖的1H-NMR中：端基质子5.0ppm左右其它质子3.54.5ppm可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键的构型（、）例如：D-葡萄糖2021/4/2693八、糖的鉴定和糖链结构的测定D-葡萄糖2021/4/2694八、糖的鉴定和糖链结构的测定 用1H-NMR可判断一些糖的相对构型，但还有一些糖由于其结构上的原因，而无法利用1H-NMR来判断相对构型。如： 2021/4/2695八、糖的鉴定和糖链结构的测定再如：其它IR葡萄糖苷在770、780 cm-1有强吸收峰；MS葡萄糖苷乙酰化物331碎片峰强度： 2021/4/2696八、糖的鉴定和糖链结构的测定513C-NMR在糖链结构测定中的应用端基碳97106ppm一般在13C-NMR谱中：如：D-葡萄糖2021/4/2697八、糖的鉴定和糖链结构的测定D-葡萄糖苷C1型97101ppm型103106ppmCH-OH(C2、C3、C4)7085ppmCH2-OH(C6)62左右CH320ppm用门控去偶技术，可判断呋喃糖的端基碳与端基质子的偶合常数。苷键JC-H170Hz苷键JC-H160Hz2021/4/2698八、糖的鉴定和糖链结构的测定苷化位移苷化位移（glycosidation shift） 糖苷化后，端基碳和苷元-C化学位移值均向低场移动，而邻碳稍向高场移动（偶而也有向低场移动的），对其余碳的影响不大，这种苷化前后的化学变化，称苷化位移。 2021/4/2699八、糖的鉴定和糖链结构的测定苷元位有取代时的苷化位移：苷元-碳手性和糖端基手性都为R（或S）时，苷化位移值与苷元为位无取代的环醇相同。如：2021/4/26100八、糖的鉴定和糖链结构的测定苷元-碳和糖端基碳手性不同时，端基碳和-碳的苷化位移值比苷元为-无取代的相应碳的苷化位移值大约为3.5ppm。 2021/4/26101八、糖的鉴定和糖链结构的测定酯苷、酚苷的苷化位移：酯苷、酚苷的苷化位移：当糖与-OH形成酯苷键或酚苷键时，其苷化位移值较特殊，端基碳和苷元-碳均向高场位移。 2021/4/26102八、糖的鉴定和糖链结构的测定三萜类化合物齐墩果酸：2021/4/26103本章重点内容掌握常见几种单糖的结构（Haworth式）；掌握化学反应的特点及应用；掌握苷键裂解的各种方法及其特点；（如：酸解、碱解、酶解、Smith降解等）1H-NMR及13C-NMR在糖苷中的应用（如：苷键构型的测定、化学位移值大致区间、糖端基碳的化学位移值、利用J值判断苷键构型、苷化位移（含酚苷和酯苷）等。）2021/4/26104The EndThe End2021/4/261059、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。24-9月-2424-9月-24Tuesday,September24,202410、低头要有勇气，抬头要有低气。*9/24/20243:40:38PM11、人总是珍惜为得到。24-9月-24*Sep-2424-Sep-2412、人乱于心，不宽余请。*Tuesday,September24,202413、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。24-9月-2424-9月-24*24September202414、抱最大的希望，作最大的努力。24九月2024*24-9月-2415、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月24*24-9月-24*24September202416、业余生活要有意义，不要越轨。*9/24/202417、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。*24-9月-24谢谢大家谢谢大家2021/4/261069、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202410、低头要有勇气，抬头要有低气。2024/9/242024/9/242024/9/249/24/20243:40:38PM11、人总是珍惜为得到。2024/9/242024/9/242024/9/24Sep-2424-Sep-2412、人乱于心，不宽余请。2024/9/242024/9/242024/9/24Tuesday,September24,202413、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202414、抱最大的希望，作最大的努力。24九月20242024/9/242024/9/242024/9/2415、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。九月242024/9/242024/9/242024/9/249/24/202416、业余生活要有意义，不要越轨。2024/9/242024/9/2424September202417、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2024/9/242024/9/242024/9/242024/9/24谢谢大家谢谢大家2021/4/26107