对人有致病性的球菌主要引起化对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症脓性炎症, ,又称又称化脓性球菌化脓性球菌。G G+ +C C：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌G G- -C C：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌布兰汉菌 1. 了解病原性球菌的概念及种类。 2. 熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、致病性和免疫性。 3. 掌握葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。 学习目的与要求第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus)（一）形态与染色（一）形态与染色 G G+ +， 球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。一、生 物 学 特 性（二）培养特性（二）培养特性营养营养：要求不高，耐盐。：要求不高，耐盐。 液体液体：均匀浑浊生长：均匀浑浊生长 普通琼脂平板普通琼脂平板： 血液琼脂平板血液琼脂平板：高盐甘露醇平板高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落淡橙黄色菌落；其他葡萄球菌为其他葡萄球菌为白色菌落白色菌落。（三）生化反应（三）生化反应活泼活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。( (如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）触酶（）触酶（）（区别于链球菌属）（区别于链球菌属）（四）抗原构造（四）抗原构造、蛋白抗原（）蛋白抗原（）、多糖抗原多糖抗原金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断）（检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断）凝固酶（）：甘油磷壁酸凝固酶（）：甘油磷壁酸（五）分类（五）分类: :个种及亚种个种及亚种、按色素分类按色素分类：金、白、柠：金、白、柠、按凝固酶分类按凝固酶分类：凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌、按噬菌体分类按噬菌体分类：金葡菌分为：金葡菌分为5 5群群2626型型 4. 4. 据色素、生化反应分：据色素、生化反应分： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌 三种葡萄球菌的主要性状三种葡萄球菌的主要性状性状性状金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌表表 皮皮葡萄球菌葡萄球菌腐腐 生生葡萄球菌葡萄球菌 色色 素素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶血浆凝固酶+溶血素溶血素+耐热核酸酶耐热核酸酶+甘露醇甘露醇+SPA+致病性致病性强弱无（六）抵抗力（六）抵抗力 无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。升汞、龙胆紫敏感。 易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（MRSAMRSA）。）。MRSAMRSA常呈多重常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为感率分别为1.3%1.3%、3%3%及及14%14%。 长期住院长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤烧伤或或有伤口的病人有伤口的病人及及与与MRSAMRSA定植或感染的病人接触定植或感染的病人接触都都是造成院内是造成院内MRSAMRSA流行的危险因素。流行的危险因素。MRSAMRSA定植或感染定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。 MRSA MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源院内流行的主要来源。 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSAMRSA）二、致病性和免疫性( (一一) )致病物质致病物质 金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。 1 1血浆凝固酶（血浆凝固酶（coagulase)coagulase)： 分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。 鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。2 2葡萄球菌溶血素（葡萄球菌溶血素（staphylolysinstaphylolysin）3 3杀白细胞素（杀白细胞素（leukocidinleukocidin）4 4肠毒素（肠毒素（enterotoxinenterotoxin）：）： （A A、B B、C1C1、C2C2、C3C3、D D、E E、G G、H 9H 9个血清个血清型）型）5 5表皮剥脱毒素（表皮剥脱毒素（exfoliative toxinexfoliative toxin）6. 6. 毒性休克综合征毒素毒性休克综合征毒素1 1（toxic shock toxic shock syndrome toxin 1, TSST1syndrome toxin 1, TSST1）（二）所致疾病（二）所致疾病 1 1侵袭性疾病：侵袭性疾病：（1 1）皮肤软组织感染皮肤软组织感染特点：病灶局限且脓汁粘稠特点：病灶局限且脓汁粘稠 （2 2）内脏器官感染内脏器官感染（3 3）全身感染全身感染（4 4）尿路感染尿路感染2 2毒素性疾病毒素性疾病（1 1）食物中毒食物中毒（2 2）烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。由表皮剥脱毒素引起。（3 3）毒性休克综合征毒性休克综合征 由由TSST1TSST1引起引起（4 4）假膜性肠炎假膜性肠炎 人类凝固酶阴性葡萄球菌（人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNSCNS）感染中）感染中以以表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌的感染最为常见。的感染最为常见。 CNS CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。3 3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性三、微三、微 生生 物物 学学 检检 验验n（一）标本采集（一）标本采集n（二）检验程序（二）检验程序n（三）检验方法（三）检验方法三、微三、微 生生 物物 学学 检检 验验（一）标本采集（一）标本采集根据病情采集标本根据病情采集标本种类种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。 注意注意：无菌操作，避免污染。：无菌操作，避免污染。（二）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液尿液、痰液脑脊液血液脑脊液血液粪便、呕吐粪便、呕吐物物直接涂片染色直接涂片染色增菌培养增菌培养分离培养分离培养（血平板）（血平板）分离培养分离培养（高盐甘露醇（高盐甘露醇平板）平板）取可疑菌落取可疑菌落鉴定试验药敏试验鉴定试验药敏试验涂片染色涂片染色血浆凝固酶血浆凝固酶耐热核酸酶耐热核酸酶其他鉴定试验其他鉴定试验报告报告初初 报报（三）检验方法 1、直接涂片、直接涂片 适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等初步报告：初步报告：“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌为葡萄球菌”或：或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌菌” 2 2、分离培养、分离培养 50ml50ml葡萄糖肉汤（增菌）葡萄糖肉汤（增菌） 浑浊浑浊无菌（无菌（7 7天）天）报告：报告：无菌生长无菌生长脑脊液脑脊液、脓液、脓液、穿刺液、咽拭、穿刺液、咽拭、尿液尿液血平板血平板血液标本血液标本5ml5ml粪便、粪便、呕吐物呕吐物高盐甘露高盐甘露醇平板醇平板（三）检验方法3 3、鉴定试验、鉴定试验（1 1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+ +）（2 2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+ +）（3 3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+ +）（）肠毒素测定：（）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生金黄色葡萄球菌产生（5 5）SPASPA检测：检测： 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（6 6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定（7 7）APIAPI葡萄球菌鉴定试剂盒葡萄球菌鉴定试剂盒（四）结果评价和报告n1 1、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到：无论任何标本中分离到均均 应鉴定并报告临床。应鉴定并报告临床。n2 2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。n3 3、尿培养计数尿培养计数：10103 3-10-104 4为阳性菌尿标准。为阳性菌尿标准。n4 4、其他凝固酶阴性葡萄球菌其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。或治疗失败时，应鉴定到种。n5 5、金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（MRSA)MRSA)：头孢菌素类抗：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实体内试验已证实MRSAMRSA对该类抗生素耐药。对该类抗生素耐药。第二节 链球菌属(Streptococcus)一、 链 球 菌一、生 物 学 特 性（一）形态与染色（一）形态与染色 G G+ +，球形或椭，球形或椭圆形，呈链状排列，圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。有荚膜。一、生 物 学 特 性（二）培养特性（二）培养特性条件条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少 数专性厌氧。数专性厌氧。液体液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。：沉淀生长（絮状或颗粒状）。普通琼脂平板普通琼脂平板：不生长。：不生长。血液琼脂平板血液琼脂平板：（三）生化反应（三）生化反应 活泼活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。 菊糖（菊糖（- -） 胆汁溶菌试验（胆汁溶菌试验（- -） optochin optochin敏感试验（敏感试验（- -） 触酶（触酶（- -）（区别于葡萄球菌属）（区别于葡萄球菌属）（区别甲链与肺链）（区别甲链与肺链）（四）抗原构造（四）抗原构造、多糖抗原（多糖抗原（C C抗原）抗原）： 群特异性。群特异性。、蛋白抗原（蛋白抗原（M M、T T、R R、S S） 型特异性，与致病有关的是型特异性，与致病有关的是M M蛋白抗原蛋白抗原。 3 3、核蛋白抗原：无特异性。、核蛋白抗原：无特异性。多糖抗原多糖抗原蛋白质抗原蛋白质抗原核蛋白核蛋白抗原抗原链球菌抗原构造模式图链球菌抗原构造模式图荚膜荚膜（五）分类（五）分类 4040个种及亚种个种及亚种、按溶血情况分类、按溶血情况分类： （1 1）甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌：菌落周围有12mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或溶血。为条件致病菌条件致病菌。 （2 2）乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个24mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。致病力强，引起多种疾病。 （3 3）丙型链球菌丙型链球菌：无溶血环，：无溶血环，不致病不致病、按抗原结构分类：、按抗原结构分类： 按按C C抗原分群：抗原分群：ABCD20ABCD20群，对人致病的以群，对人致病的以A A群群为为主。主。 按按M M蛋白分型：如蛋白分型：如A A群：群：100100个型，个型，B B群：群：4 4型，型，C C群：群：1313个型。个型。（五）分类（五）分类（六）抵抗力（六）抵抗力不强，不强，6030min6030min杀死，对多种消毒剂敏感。杀死，对多种消毒剂敏感。乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。二、致病性和免疫性（一）致病物质（一）致病物质 1 1、链球菌溶血素链球菌溶血素 （1 1）链球菌溶血素链球菌溶血素O (SLO)O (SLO) SLO SLO抗体抗体 抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素O O试验试验：协助诊断风湿热（：协助诊断风湿热（1:400)1:400) （2 2）链球菌溶血素）链球菌溶血素S (SLS)S (SLS)：无抗原性。：无抗原性。2 2、致热外毒素致热外毒素（猩红热毒素（猩红热毒素/ /红疹毒素）红疹毒素）3 3、M M蛋白蛋白 4 4、透明质酸酶透明质酸酶 5 5、链激酶链激酶 6 6、链道酶链道酶（二）所致疾病（二）所致疾病 主要由主要由A A群链球菌引起。群链球菌引起。 1 1、化脓性感染：、化脓性感染：由由皮肤伤口侵入皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入经呼吸道侵入，其他，其他 途径（如途径（如产褥热、蜂窝组织炎产褥热、蜂窝组织炎） 特点：特点：病灶界限不清病灶界限不清, ,脓汁稀薄脓汁稀薄2 2中毒性疾病中毒性疾病：猩红热猩红热 由产生致热外毒素的由产生致热外毒素的A A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。族链球菌所致的急性呼吸道传染病。3 3变态反应性疾病：变态反应性疾病： 风湿热风湿热 急性肾小球肾炎急性肾小球肾炎二、致病性和免疫性4 4其他疾病：其他疾病： 甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。内膜炎。三、微生物学检验三、微生物学检验n（一）标本采集（一）标本采集n（二）检验程序（二）检验程序n（三）检验方法（三）检验方法（一）标本采集（一）标本采集根据病情采集标本根据病情采集标本种类种类：脓液、鼻咽拭子、血液等：脓液、鼻咽拭子、血液等 风湿热查血清抗体风湿热查血清抗体（二）链球菌的检验程序痰、脓、穿刺液咽拭子等脑脊液血 液直接涂片直接涂片染色染色测抗原测抗原分离培养增菌培养增菌培养(5%CO2(5%CO2葡萄糖肉汤葡萄糖肉汤) )血平板血平板（5%CO25%CO2）可疑菌落可疑菌落鉴定试验鉴定试验初步报告初步报告血清学鉴定血清学鉴定（分群）（分群）杆菌肽试验杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 其他鉴定其他鉴定 敏感试验敏感试验 试验试验（三）链球菌的检验方法（1 1）直接镜检：）直接镜检：（痰、脓、穿刺液、（痰、脓、穿刺液、 咽拭子等）咽拭子等） 初报：发现初报：发现G G+ +球菌，球菌， 呈链状排列呈链状排列 （2 2）分离培养：）分离培养： 血液、脑脊液血液、脑脊液 肉汤增菌肉汤增菌 脓液、咽拭子等脓液、咽拭子等 血平板分离血平板分离（3 3）鉴定链球菌的主要试验：）鉴定链球菌的主要试验： 根据形态、菌落、溶血情况进行：根据形态、菌落、溶血情况进行： 杆菌肽敏感试验：杆菌肽敏感试验：A A群群敏感敏感(d10mm)(d10mm) Optochin Optochin敏感试验：敏感试验：肺炎链球菌肺炎链球菌d18mmd18mm， d15mm d400400为为+ + 二、肺炎链球菌(S.pneumoniae) 属链球菌科，链球菌属。属链球菌科，链球菌属。 广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。多数不致病。一、生 物 学 特 性（一）形态与染色（一）形态与染色 G G+ +， 矛头状，矛头状，成双（或短链）排成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。胞，有荚膜。（二）培养特性（二）培养特性条件条件：营养要求较高，兼性厌氧菌，营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02 5-10% C02生长生长最好。最好。 产生自溶酶。产生自溶酶。液体液体：培养培养24h24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。清。 普通琼脂平板普通琼脂平板：不生长。不生长。血液琼脂平板血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环草绿色溶血环（溶血）溶血） （三）生化反应（三）生化反应活泼活泼分解多种糖类。分解多种糖类。 菊糖（多数菊糖（多数 + + ） 胆汁溶菌试验（胆汁溶菌试验（+ +） Optochin Optochin试验试验(+)(+)区别甲链与肺链区别甲链与肺链（四）抗原构造（四）抗原构造、荚膜多糖抗原荚膜多糖抗原： 据此将肺炎链球菌分据此将肺炎链球菌分8585型，对人致病的有型，对人致病的有2020多型。多型。 - -型引起大叶性肺炎。型引起大叶性肺炎。、菌体多糖抗原：菌体多糖抗原： 可与可与CRPCRP反应，产生沉淀。反应，产生沉淀。 3 3、M M蛋白抗原蛋白抗原： 型特异性。型特异性。 （五）抵抗力 较弱，加热56 ，20min即死亡。 对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。w荚荚膜膜变变异异：有有荚荚膜膜的的光光滑滑（S S）型型菌菌有有毒毒力力，失去荚膜的粗糙（失去荚膜的粗糙（R R）型毒力减低或消失。型毒力减低或消失。（六）变异性二、致病性和免疫性（一）致病物质（一）致病物质 1 1、荚膜：、荚膜： 肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。 2 2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O O等等 溶血毒素溶血毒素“O”“O”：自溶后释放，能溶解人和动物自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。（二）所致疾病 存在于正常人上呼吸道，为存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌条件致病菌，仅在，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。人体抵抗力下降时才引起疾病。 可引起：可引起：大叶性肺炎大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。三、微生物学检验（一）标本采集（一）标本采集 痰液，脓液，血液，脑脊液等。痰液，脓液，血液，脑脊液等。（二）检验程序（二）检验程序（三）检验方法（三）检验方法检验程序检验程序痰、脓痰、脓脑脊液脑脊液血液血液直接涂片直接涂片 分离培养分离培养革兰染色、美兰染色革兰染色、美兰染色 荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验增菌培养（葡萄糖肉增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）汤、硫酸镁肉汤）（血平板）（血平板）挑选可疑菌落挑选可疑菌落纯培养纯培养初报初报兔血清肉汤兔血清肉汤小白鼠毒力试验小白鼠毒力试验涂片涂片 荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 菊糖发酵菊糖发酵 Optochin Optochin试验试验药敏试验药敏试验报报 告告检验方法检验方法1 1、直接镜检、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液标本。适用于：痰、脓、脑脊液标本。 报告：报告：“找到肺炎链球菌找到肺炎链球菌”2 2、分离培养、分离培养 硫酸镁肉汤硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。：均匀混浊生长，有绿色荧光。 血平板血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（有草绿色溶血环（溶血）溶血） 3 3、鉴定试验、鉴定试验（1 1）荚膜肿胀试验）荚膜肿胀试验（2 2）胆汁溶菌试验：）胆汁溶菌试验：+ +（3 3）OptochinOptochin试验：试验：+ +（4 4）菊糖发酵试验：）菊糖发酵试验：+ +（5 5）小鼠毒力试验：）小鼠毒力试验： 有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。w胆汁溶菌试验阳性胆汁溶菌试验阳性： 加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。wOptochinOptochin敏感试验阳性：敏感试验阳性：w 取肉汤培养液均匀涂取肉汤培养液均匀涂于血平板上用于血平板上用optochinoptochin纸纸片贴于接种区中央（或分片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于区划线法，纸片贴于1-21-2区）区），3535需氧培养过夜，抑需氧培养过夜，抑菌圈菌圈 18mm18mm。Optochintest肺炎链球菌的主要鉴定依据 1 1、镜下形态、镜下形态：革兰阳性球菌，矛头状成双：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外；排列，平端相对，尖端向外； 2 2、血平板菌落特点、血平板菌落特点：直径：直径0.5-1.5mm0.5-1.5mm，灰白，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。周围有草绿色溶血环。 培养或放置培养或放置24h24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。窝状。 3 3、生化鉴定、生化鉴定： Optochin Optochin试验试验+ +，胆汁溶菌试验，胆汁溶菌试验+ +。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别 形态形态 菌落菌落 血清血清 胆汁胆汁 菊糖菊糖 Opto- 小鼠小鼠 肉汤肉汤 溶菌溶菌 chin 毒力试验毒力试验肺链肺链甲链甲链矛头状，矛头状， 稍大，湿润稍大，湿润 浑浊浑浊 + + + +成双，成双， 扁平，扁平，有荚膜有荚膜 脐窝状脐窝状圆形，圆形， 较小，稍干，较小，稍干， 沉淀沉淀 无荚膜无荚膜 圆，凸起圆，凸起（四）结果评价和报告 乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。 及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。 草绿色链球菌草绿色链球菌在重症感染时，应鉴定到种。第三节第三节 肠球菌属肠球菌属 是肠道中的正常菌群是肠道中的正常菌群 导致医院内感染：如导致医院内感染：如尿路感染尿路感染、腹部和、腹部和盆腔感染、败血症、脑膜炎。盆腔感染、败血症、脑膜炎。一、生物学特性一、生物学特性（一）形态染色（一）形态染色 G G+ +球菌，球菌，单个、成双或短链状单个、成双或短链状排列。无荚膜、芽排列。无荚膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。胞，部分菌株有鞭毛。 营养要求较高。能在营养要求较高。能在高盐高盐（6.5%NaCl6.5%NaCl）、）、高碱高碱（PH9.6PH9.6）、）、高胆汁高胆汁（40%40%）、）、10451045生长。生长。 菌落菌落：圆形、中等大小、灰白色、不：圆形、中等大小、灰白色、不透明、透明、S S型，有型，有或或溶血。溶血。（二）培养特性（二）培养特性能分解多种糖类能分解多种糖类触酶（触酶（- -）PYRPYR（吡咯烷酮（吡咯烷酮-萘基酰胺）试验（萘基酰胺）试验（+ +）（三）生化反应（三）生化反应 目前分目前分1818种。引起医院内感染常见的种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。是粪肠球菌和屎肠球菌。 常用的分型方法：常用的分型方法：rRNArRNA基因探针分型法。基因探针分型法。（四）分型（四）分型（五）抵抗力（五）抵抗力 对理化因素抵抗力弱。对理化因素抵抗力弱。 但对大多数抗生素天然耐药。但对大多数抗生素天然耐药。二、微生物学检验二、微生物学检验 （一）标本采集（一）标本采集 尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。（二）检验程序（二）检验程序尿液、脓汁、尿液、脓汁、穿刺液穿刺液血血 液液涂片染色涂片染色 分离培养（血平板、分离培养（血平板、5%CO25%CO2）初初 报报挑选可疑菌落挑选可疑菌落增菌培养（葡萄糖增菌培养（葡萄糖肉汤、肉汤、5%CO25%CO2）PYR试验试验胆汁七叶胆汁七叶苷试验苷试验6.5%NaCl生长试验生长试验血清学血清学试验试验其他鉴定其他鉴定试验试验报报 告告（三）检验方法（三）检验方法1 1、直接镜检、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。2 2、分离培养、分离培养 血平板血平板：灰白色，圆形，中等大小，不透明，：灰白色，圆形，中等大小，不透明，S S型菌落，周围有型菌落，周围有溶血或溶血或溶血。溶血。 选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。3 3、鉴定试验、鉴定试验（1 1）菌属鉴定试验：）菌属鉴定试验： PYR PYR试验：肠球菌、试验：肠球菌、A A群链球菌、某些凝固群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（酶阴性葡萄球菌为（+ +） 胆汁七叶苷试验：胆汁七叶苷试验：+ + 盐耐受试验：盐耐受试验：+ +（4 4）种间鉴定试验：）种间鉴定试验：P175P175表表17-317-3第四节 奈瑟菌属(Neisseria)w 特点：为一群G-双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶 +。w 种类：共九种，主要致病菌是w 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌(merningococcus)w 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌(gonorrhoeae)一、脑膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis)即脑膜炎球菌，是流行性脑脊髓膜炎的病原体（一）生物学性状n1形态结构n2培养特性n3生化反应n4. 抗原结构n5. 抵抗力特点 （一）形态结构nG-，肾形成双排列n在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内n无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。2培养特性n营营养养要要求求高高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。n血血平平板板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。n易自溶易自溶。n巧克力平板巧克力平板：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。光滑湿润的菌落。n卵黄双抗（卵黄双抗（EPVEPV）平板平板：较大，无色，光滑湿润，：较大，无色，光滑湿润，扁平，边缘整齐的菌落。扁平，边缘整齐的菌落。n血清肉汤血清肉汤：呈微混浊。：呈微混浊。3.生化反应n分解葡萄糖、麦芽糖：+n硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素n氧化酶试验阳性4.抗原结构n可分9个血清群，对人致病的主要是A群5抵抗力特点n对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h3h，60 5min60 5min死亡。死亡。n采集标本：注意保温迅速送检。采集标本：注意保温迅速送检。n对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。 （二）致病性与免疫性n1 1致病物质致病物质：菌毛、荚膜、内毒素：菌毛、荚膜、内毒素2 2所致疾病：所致疾病：传染源、传播途径传染源、传播途径寄寄生生在在正正常常人人鼻鼻咽咽部部，存存在在易易患患人人群群，与与患患者者补补体体介介导导的的杀杀菌菌活活性性缺缺陷陷有有关关。约约2%-3%2%-3%的的人人表现为流脑症状。表现为流脑症状。3. 3. 免疫性免疫性 病原可产生群特异性抗体，但不持久。病原可产生群特异性抗体，但不持久。(三) 微生物学检验 1 1标本采集标本采集 n 菌血症期病人采集血液菌血症期病人采集血液n 有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液n 有脑膜刺激症状，抽取脑脊液有脑膜刺激症状，抽取脑脊液n带菌者：咽拭子带菌者：咽拭子 注意事项：注意事项：立即送检立即送检 注意保温（勿放冰箱）注意保温（勿放冰箱） 防干燥防干燥 防紫外线防紫外线、脑膜炎球菌的检验程序、脑膜炎球菌的检验程序 血血 液液增菌培养（葡糖增菌培养（葡糖肉汤）肉汤）分离培养分离培养（巧克力、血平板）（巧克力、血平板）鉴定试验鉴定试验涂染检涂染检 氧化酶氧化酶 葡、麦糖葡、麦糖 多价血清多价血清 药敏试验药敏试验 结果报告结果报告 鼻咽拭子鼻咽拭子 卵黄双抗平板卵黄双抗平板510%co237 1824h37 1824h37 1824h脑脊液 瘀血点离心离心上沉上沉清淀清淀液物液物510%2涂片涂片染色染色初步初步报告报告直直接接凝凝集集脑膜炎球菌的鉴定依据菌落特征符合菌落特征符合形态染色符合形态染色符合分解葡、麦糖产酸分解葡、麦糖产酸氧化酶、触酶阳性氧化酶、触酶阳性血清凝集试验阳性血清凝集试验阳性二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）即淋球菌为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源（一）生物学性状n1 1形态结构形态结构n2 2培养特性培养特性n3. 3. 生化反应生化反应n4 4抵抗力特点抵抗力特点1 1形态结构形态结构nG G- -，球形或肾形，成对排列球形或肾形，成对排列n有荚膜，无芽胞和鞭毛有荚膜，无芽胞和鞭毛2 2培养特性培养特性n营营养养要要求求高高，30-3730-37 生生长长，须须在在含含有有血血液液或或血血清清的的培培养养基基上上培培养养，常常用用血血液液、巧巧克克力力等等培培养基养基n初次分离，须初次分离，须5-10%CO5-10%CO2 2才能生长发育才能生长发育n菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明 3.生化反应n氧化酶试验：（氧化酶试验：（+ +）n触酶触酶： （+ +）n葡萄糖（葡萄糖（+ +） ，麦芽糖（，麦芽糖（- -）n易自溶易自溶4抵抗力特点抵抗力弱，抵抗力弱，在干燥环境中仅能存活在干燥环境中仅能存活1-2h1-2h，湿热，湿热55 55 5min,100 5min,100 立即死亡。室温下存活立即死亡。室温下存活1-2d1-2d。对消毒剂极敏感对消毒剂极敏感、致病物质、致病物质：菌毛、外膜蛋白、等：菌毛、外膜蛋白、等、所致疾病：、所致疾病：侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病( (首首位性病位性病) ) 新生儿眼炎新生儿眼炎（二）致病性与免疫性1标本采集 标本：标本：男性：尿道分泌物男性：尿道分泌物 女性：阴道分泌物女性：阴道分泌物 全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液种分泌物、尿液 立即送检立即送检 检验程序 (三) 微生物学检验脓汁、分泌物脓汁、分泌物直接涂片染色直接涂片染色 分分 离离 培培 养养血、巧克力、血、巧克力、TMTM平板平板5 510%co210%co23518351824h24h鉴定试验鉴定试验涂染检涂染检 氧化酶氧化酶 糖发酵糖发酵 药敏试验药敏试验报报 告告 初步报告初步报告35 1835 1824h24h（）直接涂片镜检n急性淋病：急性淋病：嗜嗜中中性性粒粒细细胞胞内内大大量量G G- -，肾肾形形双双球球菌菌具有诊断意义具有诊断意义n慢性淋病：镜检较困难慢性淋病：镜检较困难 检验方法（）分离培养（）分离培养 即即采采集集即即培培养养，常常用用含含有有两两种种以以上上抗抗生生素素（万万古古霉霉素素、粘粘菌菌素素、磺磺胺胺类类等等）的的选选择择培培养养基基上上培培养养（如（如MLML、TMTM） 5-10%CO2 5-10%CO2n培养基先预温。培养基先预温。氧化酶试验氧化酶试验： （+ +）触酶：触酶： （+ +）（多数奈瑟菌为阴性）（多数奈瑟菌为阴性）葡萄糖（葡萄糖（+ +），麦芽糖（），麦芽糖（- -） PCR PCR：灵敏，特异，标本不受限制灵敏，特异，标本不受限制( (不需活菌不需活菌) )（）鉴定（）鉴定 1.1.名词解释：名词解释： 血浆凝固酶、血浆凝固酶、SPASPA、抗链、抗链“o”“o”试验、试验、OptochinOptochin试验。试验。 2. 2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？ 3. 3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？ 4.4.根根据据链链球球菌菌在在血血平平板板上上的的溶溶血血现现象象，将将其其分分成成哪哪些些类类型？甲链和乙链有何区别？型？甲链和乙链有何区别？ 5. 5. 简述链球菌的检验程序和检验方法。简述链球菌的检验程序和检验方法。 6. 6. 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？ 7. 7.采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题？为什么？应该注意哪些问题？为什么？ 复习思考题中等大，突起，中等大，突起，有色素，有色素，S S型菌落。型菌落。葡萄球菌菌落形态葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）（普通琼脂平板）金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌有透明溶血环。表皮葡萄球菌无溶血环。葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白（蛋白（SPASPA）的意义：的意义：（1 1）降低抗体的调理作用，抗吞噬）降低抗体的调理作用，抗吞噬（2 2）协同凝集试验）协同凝集试验: :辅助诊断疾病。辅助诊断疾病。血浆凝固酶试验原理原理致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶： 一种为结合型凝固酶（凝聚因子）：细菌表面的纤维蛋白原受体与血浆中的纤维蛋白原结合，导致细菌凝集。另一种为游离型凝固酶，可被人或兔血浆中的协同因子激活，成为凝血酶样物质，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。检测方法检测方法结合型凝固酶：玻片法结合型凝固酶：玻片法游离型凝固酶：试管法游离型凝固酶：试管法耐热核酸酶试验液体培养物液体培养物煮沸煮沸15min373h甲苯胺蓝核酸琼脂肠毒素测定病人呕吐物、粪便、剩余食物病人呕吐物、粪便、剩余食物高盐肉汤高盐肉汤3724h分离培养分离培养肉汤煮沸肉汤煮沸30min30min， 离心，取上清夜离心，取上清夜幼幼 猫猫观察症状（观察症状（4h4h出现）出现）SPASPA的检测的检测致病性葡萄球菌致病性葡萄球菌 （SPA)SPA)兔抗羊红细胞兔抗羊红细胞AbAb（IgGFcIgGFc）SRBC致敏羊红细胞致敏羊红细胞凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别 结合型结合型 游离型游离型 耐热核酸耐热核酸 VP 鸟氨酸脱鸟氨酸脱 血浆凝固酶血浆凝固酶 血浆凝固酶血浆凝固酶 酶试验酶试验 试验试验 羧酶试验羧酶试验金黄色金黄色 + + + + 葡萄球菌葡萄球菌中间型中间型 + + 葡萄球菌葡萄球菌 （罕见）（罕见）希氏希氏 + + + + 葡萄球菌葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别见见P167P167表表17-117-1表3 几种常见葡萄球菌的鉴别细菌细菌 菌落颜色菌落颜色 溶血溶血 触酶触酶 凝固酶凝固酶 甘露醇甘露醇 新生霉素新生霉素金黄色金黄色 金黄色金黄色 + + + S + + + S葡萄球菌葡萄球菌表皮葡萄表皮葡萄 白色白色 + - - S + - - S球菌球菌溶血葡萄溶血葡萄 白色白色 + - - S/R + - - S/R球菌球菌腐生葡萄腐生葡萄 柠檬黄柠檬黄 + - - R + - - R球菌球菌Staphylococcus auresStaphylococcus aures（- -）表皮葡萄球菌（表皮葡萄球菌（S S）腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌(R) (R) 阴性结果阴性结果（S）新生霉素耐药试验新生霉素耐药试验链球菌菌落（血平板）：链球菌菌落（血平板）： 细小，灰白色，圆形，细小，灰白色，圆形，突起，光滑，湿润，边缘突起，光滑，湿润，边缘整齐，不同菌种菌落周围整齐，不同菌种菌落周围有不同溶血环。有不同溶血环。甲型溶血性链球菌（草绿色链球菌）丙型链球菌乙型溶血性链球菌猩红热蜂窝织炎Neisseria gonorrhoeae烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征 多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人，开始有红斑，12天有皮起皱，继而形成水疱，至表皮脱落。由表皮剥脱毒素引起。试验（B群无乳链球菌+） -+：溶血环呈：溶血环呈箭头状箭头状金黄色葡金黄色葡萄球菌萄球菌杆菌肽试验（A群链球菌+）