卫生健康体检肠道致病菌的检测卫生健康体检肠道致病菌的检测肠道门诊大便三线培养*前言前言*n根据我国食品卫生法第六章第二十六条的规定，食品生产根据我国食品卫生法第六章第二十六条的规定，食品生产经营人员必须每年进行健康检查，新参加和临时参加工作经营人员必须每年进行健康检查，新参加和临时参加工作的也必须进行健康检查，取得健康证明后方可参加工作。的也必须进行健康检查，取得健康证明后方可参加工作。n根据我国公共场所卫生管理条例第二章第七条的规定，公根据我国公共场所卫生管理条例第二章第七条的规定，公共场所从业人员必须进行健康检查，取得健康证明后方可共场所从业人员必须进行健康检查，取得健康证明后方可参加工作。参加工作。n凡患有凡患有痢疾痢疾、伤寒伤寒、病毒性肝炎等消化道传染病（包括病病毒性肝炎等消化道传染病（包括病原携带者）原携带者）是不得参加接触直接入口食品的工作，或者治是不得参加接触直接入口食品的工作，或者治愈前不得直接从事公共场所的服务工作。愈前不得直接从事公共场所的服务工作。肠道门诊大便三线培养概念概念n大便三线培养大便三线培养： 一般来说，广义的一般来说，广义的大便三线培养大便三线培养是指在医疗机构的肠道门诊中，是指在医疗机构的肠道门诊中，日常进行的一些肠道致病菌的常规检测。主要包括：日常进行的一些肠道致病菌的常规检测。主要包括：霍乱弧菌；霍乱弧菌； 沙门菌、志贺菌、（大肠埃希氏菌沙门菌、志贺菌、（大肠埃希氏菌o o157157血清型）；血清型）；副溶血弧菌；副溶血弧菌；n卫生健康体检中大便三线培养卫生健康体检中大便三线培养： 与上面相比，检测范围比较小，属于预防性体检，一般主要针对：与上面相比，检测范围比较小，属于预防性体检，一般主要针对：霍乱弧菌；霍乱弧菌；沙门菌；沙门菌；志贺菌；志贺菌；大肠埃希氏菌（大肠埃希氏菌（o o157157血清型）血清型）肠道门诊大便三线培养*肠杆菌科肠杆菌科*n是一大群寄居在人和动物肠道中的生物学性状相似的是一大群寄居在人和动物肠道中的生物学性状相似的G-无芽胞的短小杆菌，无芽胞的短小杆菌，其中其中4类常引起腹泻和肠道感染（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌类常引起腹泻和肠道感染（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）；属）；8类常导致院内感染的条件致病菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆类常导致院内感染的条件致病菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属）菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属）n形态、培养、生化特征：形态、培养、生化特征： G G- -杆状或球杆菌，无芽胞，多有鞭毛，能运动，致病性菌株多数有菌毛，多杆状或球杆菌，无芽胞，多有鞭毛，能运动，致病性菌株多数有菌毛，多数具有数具有F F、R R、COLCOL等质粒，需氧或兼性厌氧，在普通和等质粒，需氧或兼性厌氧，在普通和MACMAC培养基上生长良好，培养基上生长良好，在液体培养基内均匀混浊生长；在液体培养基内均匀混浊生长； 发酵葡萄糖，产酸或产酸产气，氧化酶阴性，触酶阳性，硝酸盐还原试验阳发酵葡萄糖，产酸或产酸产气，氧化酶阴性，触酶阳性，硝酸盐还原试验阳性；多年来乳糖发酵试验是区分致病性和非致病性肠杆菌科细菌的重要依据；性；多年来乳糖发酵试验是区分致病性和非致病性肠杆菌科细菌的重要依据；肠道门诊大便三线培养*肠杆菌科肠杆菌科*n抗原构造：抗原构造： O O抗原：是细胞壁的成分，为脂多糖（抗原：是细胞壁的成分，为脂多糖（LPSLPS），具有属、种特异性，以核心多），具有属、种特异性，以核心多糖为分子的中心，内侧是类脂糖为分子的中心，内侧是类脂A A，为内毒素的毒性处，外侧是由重复的低聚糖，为内毒素的毒性处，外侧是由重复的低聚糖组成的多糖链，决定组成的多糖链，决定O O抗原的特异性；抗原的特异性； H抗原：是不耐热的蛋白质抗原，由鞭毛蛋白多肽链上的氨基酸序列和空间抗原：是不耐热的蛋白质抗原，由鞭毛蛋白多肽链上的氨基酸序列和空间构型决定构型决定H抗原的特异性；抗原的特异性； 表面抗原：是包绕在表面抗原：是包绕在O抗原外侧的不耐热的多糖抗原，由黏液或荚膜多糖的抗原外侧的不耐热的多糖抗原，由黏液或荚膜多糖的结构决定表面抗原的特异性，在不同的菌属中表面抗原有不同的专有名称，结构决定表面抗原的特异性，在不同的菌属中表面抗原有不同的专有名称，如大肠埃希菌属的如大肠埃希菌属的K抗原、沙门菌属的抗原、沙门菌属的Vi抗原、志贺菌属的抗原、志贺菌属的B抗原等；抗原等；n变异性：主要有变异性：主要有S-R变异、变异、H-O变异变异肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌*n定义：定义：是一群寄居于人类和动物肠道中，生化反应与抗原结构相关的革兰氏是一群寄居于人类和动物肠道中，生化反应与抗原结构相关的革兰氏阴性杆菌，多数对动物致病，仅少数引起人类疾病，如导致肠热症的伤寒、阴性杆菌，多数对动物致病，仅少数引起人类疾病，如导致肠热症的伤寒、甲副、肖氏、希氏沙门氏菌等。有些动物沙门氏菌也可传染给人类，引起食甲副、肖氏、希氏沙门氏菌等。有些动物沙门氏菌也可传染给人类，引起食物中毒或败血症，如鼠伤寒沙门氏菌。物中毒或败血症，如鼠伤寒沙门氏菌。n形态和培养特性：形态和培养特性： 1 1、G G- -细长杆菌，有鞭毛和菌毛（除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌），一般无细长杆菌，有鞭毛和菌毛（除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌），一般无荚膜，均无芽胞。荚膜，均无芽胞。 2 2、需氧或兼性厌氧，最适温度需氧或兼性厌氧，最适温度3737，PH7.2PH7.27.47.4，对营养要求不高，在，对营养要求不高，在普通培养基生长良好，普通培养基生长良好，37 37 ，24h24h，能形成菌落中等大小，直径，能形成菌落中等大小，直径2 23mm3mm，圆，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落。形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落。 3 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。肠道门诊大便三线培养肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌*n生化特征：生化特征： 1 1、发酵、发酵GLUGLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气）寒沙门氏菌少数不产气） 2 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇 3 3、多多数数产产生生H H2 2S S（+ +），不不产产靛靛基基质质（- -），不不分分解解尿尿素（素（- -），不产生乙酰甲基甲醇（），不产生乙酰甲基甲醇（VPVP）（）（- -） 4 4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+ +），动力阳性（），动力阳性（+ +） 5 5、在在KCNKCN培培养养基基中中生生长长（- -），苯苯丙丙氨氨酸酸脱脱羧羧酶酶（- -）肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌*肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌*n抗原结构（血清型）：抗原结构（血清型）： 1 1、O (O (菌体菌体) )抗原抗原 是细胞壁上的脂多糖（是细胞壁上的脂多糖（LPSLPS），性质稳定，耐湿热），性质稳定，耐湿热100100数小时，不被酒数小时，不被酒精或精或0.1%0.1%石炭酸破坏，用阿拉伯数字石炭酸破坏，用阿拉伯数字1 1，2 2，3 3表示，目前发现有表示，目前发现有5858种。将种。将相同抗原组分的划归一组，称为群。相同抗原组分的划归一组，称为群。 沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原 A A群群 O O2 2 C C群群 O O6 6 C1C1亚群亚群 O O6 6、 O O7 7 C2 C2亚群亚群 O O6 6、O O8 8 B B群群 O O4 4 D D群群 O O9 9 F F群群 O O1111 E E群群 O O3 3 E2 E2亚群亚群 O O3 3、O O1010族族 E3 E3亚群亚群OO3 3、O O1515 E4 E4亚群亚群 O O1 1、O O3 3、O O1919肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌* 2 2、H H（鞭毛）抗原（鞭毛）抗原 为蛋白质，性质不稳定，不耐热，湿热为蛋白质，性质不稳定，不耐热，湿热60156015分钟或酒精处理即破坏。分钟或酒精处理即破坏。可分为可分为相和相和相。其中相。其中相特异性高，故又称特异相，以相特异性高，故又称特异相，以a a、b b、c c、dd表示；表示； 相特意性低相特意性低, ,故又称为非特意相故又称为非特意相, ,以以1 1、2 2、3 3、44表示。同时有表示。同时有相和相和相相H H抗原的称为双相菌，仅有一相者为单相菌。抗原的称为双相菌，仅有一相者为单相菌。 3 3、Vi(Vi(表面表面) )抗原抗原 化化学学成成分分为为不不耐耐热热的的聚聚-N-N-乙乙酸酸-D-D-半半乳乳糖糖胺胺糖糖醛醛酸酸，不不稳稳定定，经经60306030分分钟钟、石石炭炭酸酸处处理理或或传传代代培培养养后后易易消消失失。它它是是菌菌体体表表面面抗抗原原，有有抗抗吞吞噬噬、抗抗补体的作用。补体的作用。 4 4、菌毛抗原、菌毛抗原肠道门诊大便三线培养*沙门菌沙门菌*n临床意义：临床意义： 1、致病物质：侵袭力、内毒素、肠毒素、致病物质：侵袭力、内毒素、肠毒素 2、所致疾病：肠热症（伤寒）、胃肠炎（食物中毒）、败血症、所致疾病：肠热症（伤寒）、胃肠炎（食物中毒）、败血症（多见于儿童和免疫力低下的人）、（多见于儿童和免疫力低下的人）、无症状带菌者无症状带菌者 3、免疫性：是细菌胞内寄生微生物，人体仅主要靠细胞免疫、免疫性：是细菌胞内寄生微生物，人体仅主要靠细胞免疫 4、抵抗力：对湿热敏感，、抵抗力：对湿热敏感，65，15152020分钟灭活，水中存活分钟灭活，水中存活2 23 3周，粪便中存活周，粪便中存活1 12 2个月，在冰冻土壤中越冬，个月，在冰冻土壤中越冬，5%5%石炭酸石炭酸5 5分钟可杀分钟可杀死，对某些染料有一定耐受（死，对某些染料有一定耐受（SSSS平板）。平板）。肠道门诊大便三线培养*志贺菌志贺菌*n定义：定义：是肠道中主要的病原菌之一，导致人类细菌性痢疾的革兰氏阴性短小是肠道中主要的病原菌之一，导致人类细菌性痢疾的革兰氏阴性短小杆菌。可分为杆菌。可分为4 4个群，痢疾志贺氏（个群，痢疾志贺氏（A A群），福氏志贺氏（群），福氏志贺氏（B B群），鲍氏志贺氏群），鲍氏志贺氏（C C群），宋内氏志贺氏（群），宋内氏志贺氏（D D群），我国以群），我国以B B群最多见，占群最多见，占70%70%以上，其次为以上，其次为D D群群和和A A群。群。n形态和培养特性：形态和培养特性： 1 1、G G- -短小杆菌，无鞭毛，有菌毛，一般无荚膜，均无芽胞，胞质内有两短小杆菌，无鞭毛，有菌毛，一般无荚膜，均无芽胞，胞质内有两种质粒，与侵袭力和耐药性相关。种质粒，与侵袭力和耐药性相关。 2 2、需氧或兼性厌氧，最适温度需氧或兼性厌氧，最适温度3737，PH7.2PH7.27.47.4，对营养要求不高，在，对营养要求不高，在普通培养基生长良好，普通培养基生长良好，37 37 ，24h24h，能形成菌落中等大小，表面光滑湿润，能形成菌落中等大小，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落。无色半透明，边缘整齐的菌落。 3 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。肠道门诊大便三线培养*志贺菌志贺菌*肠道门诊大便三线培养*志贺菌志贺菌*n生化特征：生化特征： 1 1、发酵、发酵GLUGLU，产酸不产气，分解甘露醇（除，产酸不产气，分解甘露醇（除A A群外）群外） 2 2、不不发发酵酵乳乳糖糖，（宋宋内内氏氏迟迟缓缓发发酵酵，4848小小时时），不发酵蔗糖不发酵蔗糖 3 3、不不产产生生H H2 2S S（- -），不不产产靛靛基基质质（- -），不不分分解解尿尿素素（- -），不产生乙酰甲基甲醇（），不产生乙酰甲基甲醇（VPVP）（）（- -） 4 4、甲基红试验阴性（、甲基红试验阴性（- -） 5 5、动力阴性（、动力阴性（- -）肠道门诊大便三线培养*志贺菌志贺菌*n根据生化反应和根据生化反应和O抗原差异，分成抗原差异，分成4个血清个血清群和群和44个血清型个血清型 1、A群：痢疾，不分解甘露醇，有群：痢疾，不分解甘露醇，有10个血清型个血清型 2、B群：福氏，有群：福氏，有15个血清型，我国以个血清型，我国以2a、1b、3型居多型居多 3、C群：鲍氏，有群：鲍氏，有18个血清型个血清型 4、D群：宋内氏，迟缓发酵乳糖，只有群：宋内氏，迟缓发酵乳糖，只有1个血清型，但分为个血清型，但分为S和和R型两型两种菌落，其诊断因子血清无交叉凝集现象种菌落，其诊断因子血清无交叉凝集现象肠道门诊大便三线培养*志贺氏菌志贺氏菌*n临床意义：临床意义： 1、致病物质：侵袭力、内毒素、外毒素（痢疾志贺氏产生，包、致病物质：侵袭力、内毒素、外毒素（痢疾志贺氏产生，包括肠毒素、细胞毒素和神经毒素）括肠毒素、细胞毒素和神经毒素） 2、所致疾病：急性菌痢、所致疾病：急性菌痢、慢性菌痢慢性菌痢（治疗不彻底造成的反复发（治疗不彻底造成的反复发作）、作）、无症状带菌者无症状带菌者 3、免役性：人体主要靠肠道局部免疫、免役性：人体主要靠肠道局部免疫 4、抵抗力：对理化因素的抵抗力较弱，对酸敏感，对湿热敏感，、抵抗力：对理化因素的抵抗力较弱，对酸敏感，对湿热敏感，5060，1010分钟灭活，日光照射分钟灭活，日光照射3030分钟灭活，分钟灭活，1%1%石炭酸石炭酸15153030分钟分钟可杀死，容易发生可杀死，容易发生S SR R和耐药性变异，耐药性主要由和耐药性变异，耐药性主要由R R质粒决定，可质粒决定，可在细菌间传播。在细菌间传播。肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏） 采样（湿润的采样（湿润的10CM棉签、肛拭）棉签、肛拭） S.F增菌液增菌液10ml（37、18182424小时小时） GN增菌液增菌液10ml（37、4 46 6小时小时） S.S平板划线分离培养（平板划线分离培养（37、18182424小时小时） 无可疑菌落报告无可疑菌落报告 观察、挑选可疑菌落接种观察、挑选可疑菌落接种KIA或双糖铁或双糖铁 （37、18182424小时小时） 初步鉴定，根据结果做氧化酶试验等初步鉴定，根据结果做氧化酶试验等 全面生化反应实验全面生化反应实验 血清学鉴定（多价诊断血清）血清学鉴定（多价诊断血清） 报告结果报告结果肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）n沙门氏菌在沙门氏菌在KIAKIA或双糖铁上的生长情况：或双糖铁上的生长情况： 斜面产碱斜面产碱鲜红色鲜红色/ /底层产酸底层产酸黄色黄色，有少量产气或不产气，有少量产气或不产气，H H2 2S S阳性有显黑色（阳性有显黑色（A K + +A K + +）, ,动力阳性（沿穿刺线蔓延动力阳性（沿穿刺线蔓延生长）生长）n志贺氏菌在志贺氏菌在KIAKIA或双糖铁上的生长情况：或双糖铁上的生长情况： 斜面产碱斜面产碱鲜红色鲜红色/ /底层产酸底层产酸黄色黄色，不产气，不产气， H H2 2S S阴性无显黑色（阴性无显黑色（A K - -A K - -） ，动力阴性，动力阴性（只沿穿刺线生长）（只沿穿刺线生长）肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）n三糖铁斜面高层培养现象三糖铁斜面高层培养现象2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）n半固体琼脂培养现象半固体琼脂培养现象肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）n沙门氏菌血清学分型：沙门氏菌血清学分型： 1 1、先、先A-FA-F多价混合诊断血清进行玻片凝集多价混合诊断血清进行玻片凝集; ; 2 2、再单价抗、再单价抗O O因子诊断血清进行玻片凝集因子诊断血清进行玻片凝集; ; O4 O4因子血清因子血清 B B群群 O9 O9因子血清因子血清 D D群群 O3 O3因子血清因子血清 E E群群 O11 O11因子血清因子血清 F F群群 O2 O2因子血清因子血清 A A群群 O6 O6因子血清因子血清 C C群群 3 3、最后、最后H H单价抗原血清进行玻片凝集单价抗原血清进行玻片凝集; ;肠道门诊大便三线培养*检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）检测和鉴定程序（沙门氏、志贺氏）n志贺氏菌血清学分型：志贺氏菌血清学分型： 1 1、用、用4 4种志贺氏菌多价血清，如果由于表面抗原的存在而不出种志贺氏菌多价血清，如果由于表面抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再进行玻片凝集试验现凝集，应将菌液煮沸后再进行玻片凝集试验; ; 2 2、用、用A1A1，A2A2，B B群多价，群多价，C C群多价，群多价，D D群诊断血清分别试验群诊断血清分别试验; ; 3 3、依次选用型因子血清分别进行试验、依次选用型因子血清分别进行试验; ;肠道门诊大便三线培养有关配制培养基的补充有关配制培养基的补充: :从业人员体检大便三线培养基本要求从业人员体检大便三线培养基本要求*相关物品的准备相关物品的准备*n1 1、仪器设备、仪器设备 恒温培养箱恒温培养箱 干燥箱干燥箱 高压灭菌器高压灭菌器 显微镜显微镜 接种环接种环n2 2、培养基、培养基 SS SS琼脂琼脂 4 4号琼脂号琼脂( (必须用必须用9cm9cm玻离平皿玻离平皿) SF) SF和和GNGN增菌液增菌液 碱性胨水碱性胨水 KIA KIA或双糖铁或双糖铁n3 3、诊断血清、诊断血清 沙门氏多价沙门氏多价 志贺氏多价志贺氏多价 霍乱多价霍乱多价肠道门诊大便三线培养有关配制培养基的补充有关配制培养基的补充: :n检验要求及报告检验要求及报告1. 1. 检验标本必须增菌或直接接种平板进行，增菌后再次检验标本必须增菌或直接接种平板进行，增菌后再次接种平板，碱性胨水增菌液必须保存到阴性报告发出接种平板，碱性胨水增菌液必须保存到阴性报告发出后。后。2. 2. 疑似霍乱菌株必须在疑似霍乱菌株必须在18-24h18-24h内报县疾控中心。内报县疾控中心。 3. 3. 其他疑似菌株就近送县级医院或县疾控中心。其他疑似菌株就近送县级医院或县疾控中心。肠道门诊大便三线培养有关配制培养基的补充有关配制培养基的补充: :n1、配制配制S.F和和GN增菌液时，玻璃试管分装量一般为增菌液时，玻璃试管分装量一般为10ml支支，否则增菌效果不明显；，否则增菌效果不明显；n2、由于、由于S.F中的主要成分为中的主要成分为亚硒酸，遇高温会还原成硒酸，失去抑制杂菌的作用亚硒酸，遇高温会还原成硒酸，失去抑制杂菌的作用，故，故采用先把干净的玻璃空试管加硅胶塞，高压灭菌，采用先把干净的玻璃空试管加硅胶塞，高压灭菌，121，15152020分钟，分钟，再把再把S.F增菌增菌液干粉培养基按比例要求加热彻底溶解，后采用无菌手法分装；贴上配制时间的标签，液干粉培养基按比例要求加热彻底溶解，后采用无菌手法分装；贴上配制时间的标签，放冰箱冷藏，一般为放冰箱冷藏，一般为28 ，可以保质，可以保质1个月左右；但是要随时观察，如果发现个月左右；但是要随时观察，如果发现试管试管底部有红色沉淀底部有红色沉淀，说明增菌液长杂菌变质，需重新配制新的增菌液；同时，干粉培养，说明增菌液长杂菌变质，需重新配制新的增菌液；同时，干粉培养基也应放冰箱储存基也应放冰箱储存；n3 3、最好用直径、最好用直径9cm9cm的玻璃平皿配制的玻璃平皿配制SSSS平板，厚度为平板，厚度为2 23 mm3 mm，估计，估计400ml400ml的培养基倾倒的培养基倾倒2323个平皿，个平皿，贴上配制时间的标签，放冰箱储存，一般为贴上配制时间的标签，放冰箱储存，一般为28；n4 4、KIAKIA或双糖铁配制时，干粉培养基应彻底充分溶解，否则分装后每支斜面高层内含或双糖铁配制时，干粉培养基应彻底充分溶解，否则分装后每支斜面高层内含琼脂量不均匀；由于其中含糖成分，高压灭菌温度不能太高，琼脂量不均匀；由于其中含糖成分，高压灭菌温度不能太高， 110，10101515分钟；分钟；所制成的高层斜面应该规范，保留所制成的高层斜面应该规范，保留1cm1cm的垂直高度；的垂直高度；肠道门诊大便三线培养* *大肠埃希菌（大肠埃希菌（O157:H7O157:H7血清型）血清型）* *n 一般在人体肠道内，存在正常的大肠埃希菌，但是也有一些大肠埃一般在人体肠道内，存在正常的大肠埃希菌，但是也有一些大肠埃希菌具有一定的毒力，感染肠道后即可致病引起腹泻，称为致病性大希菌具有一定的毒力，感染肠道后即可致病引起腹泻，称为致病性大肠埃希菌，包括肠埃希菌，包括5种：种：n 肠产毒型（肠产毒型（ETECETEC）：主要在发展中国家引起儿童腹泻和旅行者腹泻，症状较轻，）：主要在发展中国家引起儿童腹泻和旅行者腹泻，症状较轻，可治愈；可治愈；n 肠致病型（肠致病型（EPECEPEC）：主要引起婴幼儿肠道感染，血清型有）：主要引起婴幼儿肠道感染，血清型有O55O55、O111O111等，可治愈；等，可治愈；n 肠侵袭型（肠侵袭型（EIECEIEC）：引起类似志贺菌属的菌痢症状，可治愈；）：引起类似志贺菌属的菌痢症状，可治愈；n 肠出血型（肠出血型（EHECEHEC）：它的代表菌为）：它的代表菌为O157:H7O157:H7血清型，引起的症状较严重，由并发症血清型，引起的症状较严重，由并发症所导致的死亡率在所导致的死亡率在3%3%10%10%，经粪，经粪- -口传播，形成爆发流行，口传播，形成爆发流行，19961996年在日本大阪地区就年在日本大阪地区就有上万人感染，死亡有上万人感染，死亡1111人，我国有散发病例的报告，应引起重视；人，我国有散发病例的报告，应引起重视；n 肠凝聚型（肠凝聚型（EaggECEaggEC）: :引起慢性腹泻，可治愈；引起慢性腹泻，可治愈；肠道门诊大便三线培养* *大肠埃希菌（大肠埃希菌（O157:H7O157:H7血清型）血清型）* *n生物学特性和生化特点：生物学特性和生化特点： G G- -直短杆菌，无芽胞，多数有鞭毛，能运动；直短杆菌，无芽胞，多数有鞭毛，能运动； 营养要求不高，兼性厌氧，普通琼脂上生长良好；液体培养基中混浊生长；营养要求不高，兼性厌氧，普通琼脂上生长良好；液体培养基中混浊生长；在血平板上产生在血平板上产生溶血菌落；在溶血菌落；在SSSS平板上由于发酵乳糖形成粉红色、光滑、平板上由于发酵乳糖形成粉红色、光滑、湿润菌落；湿润菌落； 吲哚、甲基红、吲哚、甲基红、V-PV-P、枸橼酸盐试验（、枸橼酸盐试验（IMVCIMVC）结果为）结果为+ + - -+ + - -；KIAKIA斜面高层斜面高层均产酸产气、均产酸产气、H2SH2S阴性，结果为阴性，结果为A A + -A A + -；动力；动力- -吲哚吲哚- -尿酶试验（尿酶试验（MIUMIU）结果为）结果为+ + -+ + -；迟缓发酵山梨醇（迟缓发酵山梨醇（ 48小时小时 ），用），用SMACSMAC平板纯培养；平板纯培养；n抗原构造：抗原构造： O（菌体）抗原；（菌体）抗原； H（鞭毛）抗原（鞭毛）抗原 ； K（表面）抗原；（表面）抗原；肠道门诊大便三线培养* *大肠埃希菌（大肠埃希菌（O157:H7O157:H7血清型）血清型）* *n检测程序：检测程序： 粪便、直肠拭子粪便、直肠拭子 涂片染色镜检涂片染色镜检 （ 37、18182424小时）血液增菌小时）血液增菌 血平板、血平板、SSSS、MACMAC、EMB EMB （ 37、18182424小时）小时） 可疑菌落（可疑菌落（ 37、18182424小时）小时） 纯培养（纯培养（SMACSMAC） 生化试验、血清学鉴定（生化试验、血清学鉴定（O157:H7O157:H7因子血清）因子血清）肠道门诊大便三线培养霍乱弧菌的检测霍乱弧菌的检测肠道门诊大便三线培养*概述与流行病学概述与流行病学*n霍乱弧菌是属于弧菌科，弧菌属，是一群革兰染色阴性，霍乱弧菌是属于弧菌科，弧菌属，是一群革兰染色阴性，菌体直或微弯曲，具有端极鞭毛，氧化酶试验阳性，葡萄菌体直或微弯曲，具有端极鞭毛，氧化酶试验阳性，葡萄糖利用试验为发酵型的细菌。糖利用试验为发酵型的细菌。n根据菌体（根据菌体（O）抗原不同，目前将霍乱弧菌分出）抗原不同，目前将霍乱弧菌分出200个以个以上的血清型，但是到现在我们仅仅只是发现上的血清型，但是到现在我们仅仅只是发现O1和和O139，这两个血清型对人类致病的。这两个血清型对人类致病的。n目前，从目前，从1817年开始至今，全世界共引起发生了七次霍乱年开始至今，全世界共引起发生了七次霍乱大流行，其中，大流行，其中，1992年发生的大流行的由年发生的大流行的由O139 引起的，引起的，其余的由其余的由O1群引起的。群引起的。肠道门诊大便三线培养*概述与流行病学概述与流行病学*n自古以来，印度恒河三角洲就是霍乱的地方性流行区，自古以来，印度恒河三角洲就是霍乱的地方性流行区，1919世纪初由于世纪初由于在通商、朝圣和战争等因素的影响下，霍乱从印度向世界各地传播。在通商、朝圣和战争等因素的影响下，霍乱从印度向世界各地传播。n我国于我国于18201820年，霍乱首次传入，其后世界上的历次大流行我国都遭受年，霍乱首次传入，其后世界上的历次大流行我国都遭受侵袭，除西藏外，其余省份几乎都波及。特别在侵袭，除西藏外，其余省份几乎都波及。特别在1924192419481948年期间，年期间，我国每年都发生，报告的病人数达数万到我国每年都发生，报告的病人数达数万到1010万，病司死率也高达万，病司死率也高达30%30%以上。以上。n解放后，我国的霍乱流行情况有所好转，但是，目前我国仍处于解放后，我国的霍乱流行情况有所好转，但是，目前我国仍处于19611961年开始的，至今尚未停息的第七次大流行期间，应该得到相应足够的年开始的，至今尚未停息的第七次大流行期间，应该得到相应足够的重视。重视。肠道门诊大便三线培养*概述与流行病学概述与流行病学*n传染源：传染源：病人（重型、中型、轻型）；病人（重型、中型、轻型）； 带菌者（潜伏期带菌、病后带菌、健康带带菌者（潜伏期带菌、病后带菌、健康带 菌）；菌）； 传播途径：经口感染的肠道传染病，常通过水、食物、生活传播途径：经口感染的肠道传染病，常通过水、食物、生活 活接触、苍蝇等传播；活接触、苍蝇等传播；人群易感性：人类不分种族、年龄、性别，对本病都是易感人群易感性：人类不分种族、年龄、性别，对本病都是易感 的；的；肠道门诊大便三线培养*病原学与检验诊断病原学与检验诊断*n分类：分类： 气单胞菌属气单胞菌属 古典生物型古典生物型 邻单胞菌属邻单胞菌属 O1群群 弧菌科弧菌科 弧菌属弧菌属 霍乱弧菌霍乱弧菌 埃尔托生物型埃尔托生物型 发光杆菌属发光杆菌属 O139群群 水栖菌属水栖菌属肠道门诊大便三线培养*病原学与检验诊断病原学与检验诊断*n形态与染色：形态与染色：革兰氏阴性，无芽胞，无荚膜，两端钝圆或稍平，油革兰氏阴性，无芽胞，无荚膜，两端钝圆或稍平，油镜下呈现鱼群般排列，单端有一根长鞭毛，运动极为活泼，在暗视野镜下呈现鱼群般排列，单端有一根长鞭毛，运动极为活泼，在暗视野显微镜下，如夜空中穿梭的流星；显微镜下，如夜空中穿梭的流星；n培养特性：培养特性：营养要求简单，兼性厌氧，培养营养要求简单，兼性厌氧，培养37适宜，初分离的增适宜，初分离的增菌培养基菌培养基PHPH为为8.48.48.68.6，数小时内快速生长，在庆大霉素和，数小时内快速生长，在庆大霉素和4 4号平板号平板上呈半透明、灰黑色、中心有灰黑点的菌落；上呈半透明、灰黑色、中心有灰黑点的菌落；n生化特性：生化特性：能发酵多种糖类，葡萄糖、麦芽糖、甘露醇等产酸不产气，迟能发酵多种糖类，葡萄糖、麦芽糖、甘露醇等产酸不产气，迟缓发酵乳糖；靛基制质反应、缓发酵乳糖；靛基制质反应、V-PV-P试验、氧化酶试验阳性；试验、氧化酶试验阳性；肠道门诊大便三线培养*病原学与检验诊断病原学与检验诊断*n抗原构造与血清分型抗原构造与血清分型 小川型（小川型（A和和B因子，少量因子，少量C因子）因子） O1 O1群群 稻叶型（稻叶型（A A和和C C因子）因子） 彦岛型（彦岛型（A A、B B和和C C因子）因子）1 1、菌体（、菌体（O O）抗原）抗原 非非O1O1群群 O139 O139 其他其他2 2、鞭毛（、鞭毛（H H）抗原）抗原n致病性：致病性：霍乱毒素、小带联结毒素、辅助霍乱肠毒素（）霍乱毒素、小带联结毒素、辅助霍乱肠毒素（）n存活力：存活力：对热、干燥、直射阳光敏感，对热、干燥、直射阳光敏感，100112 2分钟可杀死，对分钟可杀死，对低温和碱有较强耐受力，对酸和强氧化剂极其敏感。低温和碱有较强耐受力，对酸和强氧化剂极其敏感。肠道门诊大便三线培养*病原学与检验诊断病原学与检验诊断* 标本（肛拭）标本（肛拭） 增菌（碱性胨水）增菌（碱性胨水） *浑浊，有菌膜浑浊，有菌膜 （37，6 68 8小时）小时） 分离培养（分离培养（4号平板）号平板） 初步报告（阴性）初步报告（阴性） （ 37，10102020小时小时） 玻片凝集试验玻片凝集试验（结合菌落形态）（结合菌落形态） *霍乱多价诊断血清霍乱多价诊断血清 *小川、稻叶、彦岛小川、稻叶、彦岛 初步报告初步报告 *O139O139诊断血清诊断血清肠道门诊大便三线培养谢谢 谢！谢！肠道门诊大便三线培养肠道门诊大便三线培养