医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术目目 录录第一节第一节区带电泳区带电泳 第二节第二节等电聚焦电泳等电聚焦电泳 第三节第三节SDS-PAGE电泳电泳 第四节第四节二维电泳二维电泳 第五节第五节印迹技术印迹技术 第六节第六节免疫电泳免疫电泳 第七节第七节高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳技术 第八节第八节电泳分析仪电泳分析仪 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术基本原理基本原理不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。蛋白质分子为两性电解质蛋白质分子为两性电解质等电点等电点pH等电点等电点 带负电带负电pH等电点等电点 带正电带正电电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术质点所带净电荷量越多（介质的质点所带净电荷量越多（介质的pH值离等电点越远）值离等电点越远）质点的直径越小质点的直径越小越接近球形越接近球形则它在电场中的泳动速度越快，迁移率亦越大。则它在电场中的泳动速度越快，迁移率亦越大。基本原理基本原理电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术区带电泳区带电泳检验医学中的应用血清蛋白电泳检验医学中的应用血清蛋白电泳图图 6-1 6-1 正常血清蛋白电泳图谱正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；下图：光密度扫描后电泳图谱；HPHP：触珠蛋白；：触珠蛋白；CPCP：铜蓝蛋白：铜蓝蛋白Alb：清蛋白：清蛋白1：1酸性糖蛋白、1抗胰蛋白酶2：HP、CP、2巨球蛋白、脂蛋白：运铁蛋白、补体系统、：运铁蛋白、补体系统、脂蛋白：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术区带电泳区带电泳 图图6-2 6-2 几种常见异常血清蛋白图谱几种常见异常血清蛋白图谱A A：双清蛋白血清电泳图；：双清蛋白血清电泳图；B B：慢性肝病或肝硬变常见的：慢性肝病或肝硬变常见的 - - 融融合的桥连现象；合的桥连现象；C C：免疫球蛋白寡克隆增生型；：免疫球蛋白寡克隆增生型；D D：M M蛋白血清蛋白血清型（型（IgAIgA型）；型）；N N：正常对照血清；：正常对照血清；P P：患者血清：患者血清A BC D电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术区带电泳区带电泳检验医学中的应用检验医学中的应用 同工酶电泳同工酶电泳 图图6-3 LDH6-3 LDH同工酶区带电泳图谱同工酶区带电泳图谱左：左：5 5份血清份血清iso-LDHiso-LDH电泳图；右：电泳图；右：iso-LDHiso-LDH电泳示意图电泳示意图电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第一节第一节 区带电泳区带电泳检验医学中的应用检验医学中的应用 同工酶电泳同工酶电泳 图图6-4 CK6-4 CK同工酶示意图同工酶示意图左：血清左：血清iso-CKiso-CK电泳图，电泳图，3 3示正示正常血清（常血清（CK MB5%CK MB5%CK MB5%）；）；4 4示示CK BBCK BB阳性；阳性；右：右：iso-CKiso-CK电泳图谱示意图电泳图谱示意图 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术区带电泳区带电泳实验原理实验原理 让让pHpI（max）所有蛋白质带负电所有蛋白质带负电各种蛋白质带电量不同各种蛋白质带电量不同电泳速度不同电泳速度不同经过一段时间电泳后，各种蛋白质被区分开经过一段时间电泳后，各种蛋白质被区分开电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术区带电泳区带电泳图图 6-1 6-1 正常血清蛋白电泳图谱正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；下图：光密度扫描后电泳图谱；HPHP：触珠蛋白；：触珠蛋白；CPCP：铜蓝蛋白：铜蓝蛋白Alb：清蛋白：清蛋白1：1酸性糖蛋白、1抗胰蛋白酶2：HP、CP、2巨球蛋白、脂蛋白：运铁蛋白、补体系统、：运铁蛋白、补体系统、脂蛋白：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第二节第二节 等电聚焦电泳等电聚焦电泳检验医学中的应用检验医学中的应用次级同工酶的分离次级同工酶的分离 图图 6-5 6-5 碱性磷酸酶同工酶等电聚焦电泳图谱碱性磷酸酶同工酶等电聚焦电泳图谱左：左：iso-ALPiso-ALP等电聚焦示意图；右：胆道梗阻性疾病等电聚焦示意图；右：胆道梗阻性疾病iso-ALPiso-ALP电泳图谱电泳图谱电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第二节第二节 等电聚焦电泳等电聚焦电泳 区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在泳道中本来就有泳道中本来就有“固定固定”位置，蛋白质在相应的位位置，蛋白质在相应的位置上停留？置上停留？蛋白质如何能够停止电泳？蛋白质如何能够停止电泳？除了切断电源之外？除了切断电源之外？蛋白质不带电了蛋白质不带电了蛋白质处于等电点溶液中蛋白质处于等电点溶液中电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第二节第二节 等电聚焦电泳等电聚焦电泳 基本原理基本原理在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的pH梯度介梯度介质，使质，使pH值从正极向负极渐次增加，形成一线性值从正极向负极渐次增加，形成一线性pH梯度梯度。蛋白质混合物加入有蛋白质混合物加入有pH梯度的电泳管中，在电梯度的电泳管中，在电场中经一定时间后，混合物中各组分将分别场中经一定时间后，混合物中各组分将分别聚焦聚焦在在与各与各等电点等电点相应的相应的pH介质区域，形成分离的各种介质区域，形成分离的各种蛋白质区带。这就是蛋白质区带。这就是等电聚焦电泳等电聚焦电泳分离蛋白质的基分离蛋白质的基本原理。本原理。电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第三节第三节 SDS-PAGE电泳电泳 等电聚焦根据等电点将蛋白质分离等电聚焦根据等电点将蛋白质分离那还能不能根据其他性质将蛋白质分离那还能不能根据其他性质将蛋白质分离?区带电泳的电泳速度的影响条件较多区带电泳的电泳速度的影响条件较多（大小、电荷、形状），不是根据单一（大小、电荷、形状），不是根据单一性质分离性质分离有一种方法能根据蛋白质的分子量使之有一种方法能根据蛋白质的分子量使之带上相应的电荷，远远大于蛋白质本身带上相应的电荷，远远大于蛋白质本身电荷的大小，并使电荷成为电泳速度的电荷的大小，并使电荷成为电泳速度的主要决定因素，那么电泳速度只和分子主要决定因素，那么电泳速度只和分子量相关量相关电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第三节第三节 SDS-PAGE电泳电泳 SDS是一种阴离子表面活性剂，是一种阴离子表面活性剂，能使蛋白能使蛋白质负载了大量负电荷，大大超过了天然质负载了大量负电荷，大大超过了天然蛋白质的原有电荷，因此蛋白质之间原蛋白质的原有电荷，因此蛋白质之间原有电荷的差异就无显著效应，蛋白质有电荷的差异就无显著效应，蛋白质带带电量电量的多少，只与蛋白质大小即的多少，只与蛋白质大小即分子量分子量有关，此时，有关，此时，不同泳动速率仅反映了各不同泳动速率仅反映了各蛋白质亚基的分子量的差别蛋白质亚基的分子量的差别。电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第三节第三节 SDS-PAGE电泳电泳检验医学中的应用检验医学中的应用非浓缩尿蛋白电泳非浓缩尿蛋白电泳图图 6-7 6-7 非浓缩尿蛋白电泳非浓缩尿蛋白电泳示意图示意图电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第三节第三节 SDS-PAGE电泳电泳检验医学中的应用检验医学中的应用非浓缩尿蛋白电泳非浓缩尿蛋白电泳 图图 6-8 6-8 临床常见蛋白尿电泳图谱临床常见蛋白尿电泳图谱左：肾小球性蛋白尿；左：肾小球性蛋白尿；中：肾小管性蛋白尿，泳道中：肾小管性蛋白尿，泳道4 4示混合性蛋白尿，肾小管性蛋白尿为主型；示混合性蛋白尿，肾小管性蛋白尿为主型；右：混合型蛋白尿右：混合型蛋白尿电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术一个条带中仍是混合着多种蛋一个条带中仍是混合着多种蛋白质，如何再把它们分开呢？白质，如何再把它们分开呢？电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第四节第四节 二维电泳二维电泳图图 6-9 6-9 二维电泳原理及流程图二维电泳原理及流程图电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第四节第四节 二维电泳二维电泳 基本原理基本原理第一维电泳第一维电泳，即等电聚焦电泳，即等电聚焦电泳(isoelectric focusing，IEF)其基本原理是利用蛋白质分其基本原理是利用蛋白质分子等电点的不同对其进行分离；子等电点的不同对其进行分离；第二维电泳第二维电泳，即，即SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，使电泳迁移率主要取决于蛋，使电泳迁移率主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。白质或亚基分子量的大小。 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第四节第四节 二维电泳二维电泳检验医学中的应用检验医学中的应用电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术一个问题：如何确定某个条带一个问题：如何确定某个条带是什么蛋白质？是什么蛋白质？图图 6-1 6-1 正常血清蛋白电泳图谱正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；下图：光密度扫描后电泳图谱；HPHP：触珠蛋白；：触珠蛋白；CPCP：铜蓝蛋白：铜蓝蛋白电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第五节第五节 印迹技术印迹技术免疫印迹法基本原理免疫印迹法基本原理图图 6-13 6-13 免疫印迹法的原理免疫印迹法的原理电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第五节第五节 印迹技术印迹技术免疫印迹法（免疫印迹法（Immunoblotting）又称蛋白质印迹又称蛋白质印迹(Western blot) ，因与早先，因与早先建立的检测核酸的建立的检测核酸的Southern blot 相类似，亦被相类似，亦被称为称为Western blot，是一种借助特异性抗体鉴，是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。定抗原的有效方法。被检测物是蛋白质被检测物是蛋白质，“探探针针”是抗体是抗体，“显色显色”用标记二抗用标记二抗。电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第五节第五节 印迹技术印迹技术共分三个阶段进行共分三个阶段进行SDS-PAGE电转移电转移酶免疫定位酶免疫定位 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第五节第五节 印迹技术印迹技术免疫印迹法在检验医学中的应用免疫印迹法在检验医学中的应用自身抗体检测中的应用自身抗体检测中的应用电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第五节第五节 印迹技术印迹技术 图图 6-14 6-14 免疫印迹法在自身抗体免疫印迹法在自身抗体ENAENA检测中的应用检测中的应用电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 电泳技术电泳技术与与免疫技术免疫技术相结合，大大扩大了相结合，大大扩大了其临床应用的范围，于其临床应用的范围，于1953年年Grabar和和Williams首次将凝胶扩散置于直流电场中进行，首次将凝胶扩散置于直流电场中进行，让电流来加速抗原与抗体的扩散并规定其运行让电流来加速抗原与抗体的扩散并规定其运行方向，并与免疫沉淀反应相结合方向，并与免疫沉淀反应相结合,该技术有两该技术有两大优点，大优点，一是加快了沉淀反应的速度一是加快了沉淀反应的速度，二是将二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分离某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分离开，再分别与其对应抗体反应，以此作更细微开，再分别与其对应抗体反应，以此作更细微的分析的分析。 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 对流免疫电泳对流免疫电泳(CIEP) 图图 6-15 6-15 对流免疫电泳示意图及应用（对流免疫电泳示意图及应用（1 1：阳性；：阳性；2 2：弱阳性；：弱阳性；3/43/4：强阳性）：强阳性）电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(RIE) 实验原理实验原理：在含抗体的琼脂板一端打一排抗原孔；加在含抗体的琼脂板一端打一排抗原孔；加入待测标本后，将抗原置阴极端，用横距入待测标本后，将抗原置阴极端，用横距23mA/cm的电流强度进行电泳。抗原泳向阳极，的电流强度进行电泳。抗原泳向阳极，在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀。随着泳在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀。随着泳动抗原的减少，抗原泳动的基底区越来越窄，动抗原的减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成抗原抗体复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个状如火箭的沉淀峰。一个状如火箭的沉淀峰。 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(RIE)图图 6-16 Laurell 技术示意图及火箭免疫电泳图谱技术示意图及火箭免疫电泳图谱Ag：抗原；：抗原；1、2、3为待测标本；为待测标本；4、5、6为标准为标准电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(RIE)检验医学中的应用检验医学中的应用火箭电泳放射自显影定量甲胎蛋白火箭电泳放射自显影定量甲胎蛋白图图 6-17 6-17 火箭电泳放射自显影定量检测火箭电泳放射自显影定量检测AFPAFP图谱图谱电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳 火箭免疫电泳火箭免疫电泳(RIE)检验医学中的应用检验医学中的应用血清脂蛋白血清脂蛋白ApoA1和和ApoB火箭电泳火箭电泳 图图 6-18 血清脂蛋白血清脂蛋白ApoA1和和ApoB火箭电泳分析图谱火箭电泳分析图谱1、2、3、4、5示标准；示标准；6、7、8示待测标本示待测标本 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳免疫电泳免疫电泳(IEP )技术技术是是区带电泳区带电泳与与免疫双扩散免疫双扩散相结合的一种免疫相结合的一种免疫化学分析技术。化学分析技术。 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳免疫电泳免疫电泳(IEP)技术基本原理技术基本原理电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳免疫电泳免疫电泳(IEP )技术技术检验医学中的应用检验医学中的应用 表表1 1 血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分血浆免疫电泳各区带所含蛋白成分Alb12前白蛋白前白蛋白白蛋白白蛋白1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶1 1- -酸糖蛋白酸糖蛋白1 1- -抗糜蛋白酶抗糜蛋白酶1 1- -脂蛋白脂蛋白甲胎蛋白甲胎蛋白触珠蛋白触珠蛋白铜蓝蛋白铜蓝蛋白2 2- -巨球蛋白巨球蛋白转铁蛋白转铁蛋白C3C3、C4C4脂蛋白脂蛋白2 2- -微球蛋白微球蛋白纤维蛋白原纤维蛋白原C C反应蛋白反应蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳免疫固定电泳免疫固定电泳(IFE)检验医学中的应用检验医学中的应用图图 6- 21 6- 21 血清免疫固定电泳图血清免疫固定电泳图左：左：IgA-型型M蛋白；右：双蛋白；右：双M蛋白（蛋白（IgG-、IgA-）电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第六节第六节 免疫电泳免疫电泳免疫固定电泳免疫固定电泳(IFE)技术优势技术优势 周期短周期短敏感性高敏感性高分辨率好分辨率好结果易分析结果易分析 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第七节第七节 高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳技术 基本原理基本原理电电 渗渗 流流电电电电 流流流流蛋白泳动蛋白泳动蛋白泳动蛋白泳动+ 电电电电 源源源源检检检检 测测测测 器器器器泳泳泳泳 动动动动温温温温 度度度度 控控控控 制制制制 器器器器 缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液+ 缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液图图 6-23 6-23 高效毛细管电泳原理图高效毛细管电泳原理图电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第七节第七节 高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳的分离模式高效毛细管电泳的分离模式毛细管区带电泳毛细管区带电泳 (capillary zone electrophoresis, CZE)毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（capillary gel electrophoresis, CGE）胶束电动力学毛细管色谱（胶束电动力学毛细管色谱（micellar electrokinetic capillary chromatography, MECC) 等电聚焦电泳（等电聚焦电泳（isoelectric focusing, IEF)等速聚焦电泳等速聚焦电泳 (isotachophoresis, ITP)毛细管电色谱（毛细管电色谱（capillary electrochromatography, CEC）亲和毛细管电泳（亲和毛细管电泳（affinity capillary electrophoresis, ACE） 电动色谱电动色谱(electrokinetic chromatography, EKC) 非水相毛细管电泳（非水相毛细管电泳（non-aqueous capillary electrophoresis, NACE） 电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第八节第八节 电泳分析仪电泳分析仪 电泳分析仪的基本结构电泳分析仪的基本结构电源电源 可分为稳流、稳压、稳功率可分为稳流、稳压、稳功率电泳槽电泳槽电泳区带分析装置电泳区带分析装置电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第八节第八节 电泳分析仪电泳分析仪 半自动电泳分析仪半自动电泳分析仪图图 6-26 HELANA6-26 HELANA半自动电泳分析仪半自动电泳分析仪电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术第八节第八节 电泳分析仪电泳分析仪 全自动电泳分析仪全自动电泳分析仪图图 6-27 Sebia6-27 Sebia全自动电泳仪全自动电泳仪电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术 谢谢 谢谢电泳技术电泳技术PPT课件课件医用检验技术及应用 电泳技术思考题思考题1.二维电泳中，分别是哪二维电泳，分别二维电泳中，分别是哪二维电泳，分别根据蛋白质的什么性质进行分离？根据蛋白质的什么性质进行分离？2.免疫印迹法分哪几个步骤？免疫印迹法分哪几个步骤？电泳技术电泳技术PPT课件课件