实验三实验三 显微镜的使用、霉菌的形态及细菌三型的显微镜的使用、霉菌的形态及细菌三型的观察观察主讲人：刘主讲人：刘 涛涛 李开李开一、实验目的一、实验目的vv观察霉菌的形态结构特征观察霉菌的形态结构特征观察霉菌的形态结构特征观察霉菌的形态结构特征vv学习掌握霉菌水浸片制作的基本方法学习掌握霉菌水浸片制作的基本方法学习掌握霉菌水浸片制作的基本方法学习掌握霉菌水浸片制作的基本方法P74P74实验（一）实验（一） 霉菌的形态观察霉菌的形态观察 霉菌霉菌霉菌霉菌：凡在营养基质上形成：凡在营养基质上形成：凡在营养基质上形成：凡在营养基质上形成绒毛状绒毛状绒毛状绒毛状、棉絮状棉絮状棉絮状棉絮状或或或或蜘蛛网形蜘蛛网形蜘蛛网形蜘蛛网形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌丝两类丝两类丝两类丝两类. . . .二、实验原理二、实验原理黑曲霉黑曲霉v属属于于半半知知菌菌亚亚门门, , 菌菌丝丝有有隔隔, ,细细胞胞多多核核；部部分分气气生生菌菌丝丝细细胞胞形形成成特特化化的的厚厚壁壁、膨膨大大的的足足细细胞胞，由由足足细细胞胞的的中中间间稍稍呈呈垂垂直直地地向向上上延延长长，形形成成分分生孢子梗。生孢子梗。 青霉青霉v属属于于半半知知菌菌亚亚门门, ,分分生生孢孢子子梗梗基基部部无无足足细细胞胞，孢孢子子梗梗顶顶端端不不膨膨大大成成囊囊，而而是是多多次次分分枝枝形形成成扫扫帚帚状状，小小梗梗末末端端形形成分生孢子。成分生孢子。根霉根霉v横横向向生生长长的的菌菌丝丝产产生生假假根根，附附着在基质上。着在基质上。 v菌菌丝丝无无隔隔、无无性性生生殖殖产产生生孢孢囊囊孢子，有性生殖产生接合孢子。孢子，有性生殖产生接合孢子。三、实验材料三、实验材料vv真菌培养物真菌培养物 1. 1. 黑曲霉、根霉、青霉的培养物。黑曲霉、根霉、青霉的培养物。黑曲霉、根霉、青霉的培养物。黑曲霉、根霉、青霉的培养物。 2. 2. 黑曲霉黑曲霉黑曲霉黑曲霉、根霉、青霉根霉、青霉根霉、青霉根霉、青霉示范片。示范片。示范片。示范片。vv显微镜、载玻片、接种环、解剖针、酒精灯、镊子显微镜、载玻片、接种环、解剖针、酒精灯、镊子显微镜、载玻片、接种环、解剖针、酒精灯、镊子显微镜、载玻片、接种环、解剖针、酒精灯、镊子等。等。等。等。vv5050酒精、蒸馏水等。酒精、蒸馏水等。酒精、蒸馏水等。酒精、蒸馏水等。四、实验步骤：四、实验步骤：霉菌水浸片的制作和观察：霉菌水浸片的制作和观察：1、黑曲霉、青霉的水浸片的制作、黑曲霉、青霉的水浸片的制作取一块干净的载玻片，滴加取一块干净的载玻片，滴加50的乙醇一滴的乙醇一滴用解剖针挑取少量有孢子的霉菌菌丝（注意曲霉和青霉需要用解剖针挑取少量有孢子的霉菌菌丝（注意曲霉和青霉需要适当挑取一点培养基）浸入乙醇洗涤适当挑取一点培养基）浸入乙醇洗涤于另一干净载玻片上加一滴蒸馏水，再将洗涤后的菌丝置于于另一干净载玻片上加一滴蒸馏水，再将洗涤后的菌丝置于蒸馏水中，用解剖针将菌丝尽量分散，蒸馏水中，用解剖针将菌丝尽量分散，盖上盖玻片，用橡皮或塑料请轻轻敲击。盖上盖玻片，用橡皮或塑料请轻轻敲击。镜检：镜检：10x ，40x物镜观察。物镜观察。2、葡枝根霉水浸片的制作、葡枝根霉水浸片的制作先用先用 10x 物镜直接观察生长在培养皿盖上的根霉物镜直接观察生长在培养皿盖上的根霉菌丝，因菌丝是立体形态，观察时应将显微镜载菌丝，因菌丝是立体形态，观察时应将显微镜载物台上下移动，以便看清菌丝全貌。物台上下移动，以便看清菌丝全貌。再取一载玻片，滴一滴蒸馏水，解剖针挑取少量根再取一载玻片，滴一滴蒸馏水，解剖针挑取少量根霉菌丝浸入水滴中，用解剖针将菌丝拨散、分开，霉菌丝浸入水滴中，用解剖针将菌丝拨散、分开，盖上盖玻片。盖上盖玻片。10x 物镜观察菌丝、假根、孢子囊。物镜观察菌丝、假根、孢子囊。黑曲霉黑曲霉vv观察观察黑曲霉黑曲霉菌丝分隔情况菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细重辨认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）胞和分生孢子）青霉的帚状枝与分生孢子青霉的帚状枝与分生孢子副枝副枝梗基梗基小梗小梗vv观察青霉分观察青霉分观察青霉分观察青霉分生孢子着生生孢子着生生孢子着生生孢子着生情况（着重情况（着重情况（着重情况（着重辨认分生孢辨认分生孢辨认分生孢辨认分生孢子梗和分生子梗和分生子梗和分生子梗和分生孢子）孢子）孢子）孢子）葡枝根霉葡枝根霉接合孢子囊轴囊轴囊托囊托孢子囊梗孢子囊梗孢子囊孢子囊囊轴囊轴观察观察根霉根霉菌丝情况和子菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、认孢子囊、包囊梗、假根）假根）五、实验结果五、实验结果vv绘制青霉绘制青霉 (40x)、黑曲霉、黑曲霉 (40x)、根霉、根霉(10x)的形态的形态，注明各部分名称。，注明各部分名称。六六、思考题、思考题v你认为在显微镜下，细菌和霉菌的主要区别是什么？你认为在显微镜下，细菌和霉菌的主要区别是什么？ vv在霉菌的制片过程中，你觉得要注意哪些环节才能制得在霉菌的制片过程中，你觉得要注意哪些环节才能制得在霉菌的制片过程中，你觉得要注意哪些环节才能制得在霉菌的制片过程中，你觉得要注意哪些环节才能制得好的片子好的片子好的片子好的片子? ? ? ?实验实验( (二二) ) 油镜的使用油镜的使用vv学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识的基本知识的基本知识的基本知识vv初步认识细菌的基本形态初步认识细菌的基本形态初步认识细菌的基本形态初步认识细菌的基本形态实验目的实验目的实验原理实验原理vv显微镜的构造显微镜的构造 1.1.1.1.光学部分光学部分光学部分光学部分: : : :目镜目镜目镜目镜 、物镜、物镜、物镜、物镜 、照明装置照明装置照明装置照明装置( ( ( (聚光镜、虹彩光圈、聚光镜、虹彩光圈、聚光镜、虹彩光圈、聚光镜、虹彩光圈、反光镜等反光镜等反光镜等反光镜等) ) ) )。它使检视物放大，。它使检视物放大，。它使检视物放大，。它使检视物放大，生成物象。生成物象。生成物象。生成物象。2.2.2.2.机械部分机械部分机械部分机械部分: : : :镜座、镜臂、镜筒、镜座、镜臂、镜筒、镜座、镜臂、镜筒、镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台物镜转换器、载物台、载物台物镜转换器、载物台、载物台物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器转移器、粗调节器、细调节器转移器、粗调节器、细调节器转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持调节等部件。它起着支持调节等部件。它起着支持调节等部件。它起着支持调节 固定固定固定固定等作用。等作用。等作用。等作用。图图图图1-1-2 1-1-2 光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像油镜使用的原理油镜使用的原理 油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。量，从而使物象更加清晰。量，从而使物象更加清晰。量，从而使物象更加清晰。浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。二、显微操作二、显微操作现场演示现场演示1.1.1.1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察观察观察观察2.2.2.2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。至看清物象为止。至看清物象为止。至看清物象为止。3.3.3.3.换片：另换新片，必须从第换片：另换新片，必须从第换片：另换新片，必须从第换片：另换新片，必须从第1 1 1 1条开始操作。条开始操作。条开始操作。条开始操作。4.4.4.4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。镜体全部复原。镜体全部复原。镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头用油镜观察细菌三型永久装片。用油镜观察细菌三型永久装片。1. 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。2. 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度洁度洁度洁度3. 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4. 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。单手拿，更不可倾斜拿。单手拿，更不可倾斜拿。单手拿，更不可倾斜拿。5. 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。蚀镜片。蚀镜片。蚀镜片。显微镜保养和使用中的注意事项显微镜保养和使用中的注意事项实验结果实验结果v绘制细菌三型。绘制细菌三型。v思考题：思考题：P47：1、3本次实验课结束本次实验课结束所用器皿自己洗净！所用器皿自己洗净！请第二组同学留下值日请第二组同学留下值日下周再见！下周再见！